BsaI хязгаарлалтын эндонуклеаз
Тодорхойлолт
BsaI хязгаарлалтын фермент нь E.coli-ээр илэрхийлэгддэг Bacillus sphaericus-ийн BspQI генээр кодлогдсон рекомбинант уургаас гаралтай II төрлийн хязгаарлалтын эндонуклеаз юм.Хязгаарлалтын эндонуклеазууд нь генийн зураглал, клончлол болон бусад салбарт өргөн хэрэглэгддэг.Энэ фермент нь генийг үр ашигтай шугаман болгохын тулд ДНХ-г хурдан тасалдаг Bsa I, IIs хязгаарлалтын эндонуклеазыг хязгаарлах эндонуклеаз нь Bacillus stearothermophilus-ийн хувилсан, өөрчилсөн BsaI генийг агуулсан рекомбинант E. coli омогоос гаралтай.уугуул ферментүүдтэй ижил өвөрмөц шинж чанартай, одны идэвхжил буурсан.Түүний таних дараалал болон хуваагдлын газрууд нь дараах байдалтай байна.
5'·····GGTCTC(N)······ ··3'
3'·····CCAGAG(NNNNN)······5'
Химийн бүтэц
Бүтээгдэхүүний онцлог
• Ретрикцион эндонуклеаз нь ферментийн өндөр идэвхжилтэй бөгөөд хоол боловсруулах урвалыг хурдан гүйцэтгэнэ.
• Өвөрмөц бус эндонуклеазын идэвхжил багатай, нарийн "хүсчээр" зүсэх боломжтой.
• BSA системгүй, дулааны эх үүсвэрийн бохирдлыг бууруулна.
Тодорхойлолт
| Туршилтын зүйлс | Үзүүлэлтүүд |
| Ферментийн үйл ажиллагаа | 20 U/µL |
| Цэвэр байдал (SDS-PAGE) | ≥95% |
| Rnase | Аль нь ч илрээгүй |
| Өвөрмөц бус DNase үйл ажиллагаа | Илрээгүй |
| Оддын үйл ажиллагаа | Илрээгүй |
| Холбох ба дахин зүсэх | Хоол боловсруулсны дараа ДНХ-ийн хэсгүүдийг холбож болно.Мөн эдгээр холбосон хэлтэрхийнүүд нь Bsal-аар дахин таслагдах боломжтой. |
| Эндотоксин (LAL-тест) | ≤10 ЕХ/мг |
| E.Coli ДНХ | ≤1 хуулбар/2U |
Чанарын шалгалт
Цэвэршилт ≥ 95%, DNase байхгүй, RNase идэвхжилгүй, Хүлээн авагчийн ДНХ-ийн үлдэгдэл ≤ 100pg/mg, эзэн уургийн үлдэгдэл ≤ -50ppm, эндотоксины үлдэгдэл ≤ 10EU/mg, Протеазын идэвхгүй, ариутгасан, микоплазмгүй
Өргөдөл
Поли (A/T/C/G)-ийн төгсгөлд шугаман ДНХ-ийн фрагмент бэлтгэхийн тулд плазмидыг задлах;
In vitro транскрипц хийхээс өмнө плазмидын загварыг шугаман болгох;
Хоол боловсруулах хязгаарлалт;
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгжийг 1 мкг Дотоод хяналтын ДНХ-ийг 1 цагийн дотор 37°С-т нийт 50 мкл урвалын эзэлхүүнтэй шингээхэд шаардагдах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Тээвэрлэлт, хадгалалт
Тээвэр:-15 хэмээс доош тээвэрлэнэ
Хадгалах:-25~-15°С хэмд хадгална
Санал болгож буй дахин туршилтын хугацаа:1 жил
