ДНаз I
DNase I (Deoxyribonuclease I) нь нэг буюу хоёр хэлхээтэй ДНХ-г шингээх чадвартай эндодеоксирибонуклеаз юм.Энэ нь фосфодиэфирийн холбоог таньж, задалж, монодеоксинуклеотид эсвэл 5′-терминал дээр фосфатын бүлэг, 3′-терминал дээр гидроксил агуулсан нэг эсвэл хоёр судалтай олигодеоксинуклеотид үүсгэдэг.DNase I-ийн идэвхжил нь Ca2+-аас хамаардаг ба Mn2+, Zn2+ зэрэг хоёр валенттай металлын ионуудаар идэвхждэг.5мМ Са2+ нь ферментийг гидролизээс хамгаална.Mg2+ байгаа тохиолдолд фермент нь ДНХ-ийн аль ч хэлхээний аль ч хэсгийг санамсаргүй байдлаар таньж, салгаж чаддаг.Mn2+ байгаа тохиолдолд ДНХ-ийн давхар хэлхээг нэгэн зэрэг таньж, бараг нэг цэг дээр задалж, 1-2 нуклеотид цухуйсан хавтгай төгсгөлийн ДНХ-ийн хэлтэрхий эсвэл наалдамхай төгсгөлийн ДНХ-ийн хэлтэрхий үүсгэдэг.
Бүтээгдэхүүний өмч
Үхрийн нойр булчирхайн DNase I-ийг мөөгөнцрийн экспрессийн системд илэрхийлж, цэвэршүүлсэн.
Cөрсөлдөгчид
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase агуулаагүй | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Тээвэрлэлт, хадгалалт
1. Хадгалалтын тогтвортой байдал: – Хадгалахад 15℃~-25℃;
2.Тээврийн тогтвортой байдал: Мөсөн дор тээвэрлэх;
3. Оруулсан: 10 мМ Tris-HCl, 2 мМ CaCl2, 50% глицерин, рН 7.6 25℃.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь 1 мкг pBR322 ДНХ-ийг 37 хэмд 10 минутын дотор бүрэн задлах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Чанарын шалгалт
RNase:1.6 мкг MS2 РНХ агуулсан 5U DNase I-ийг 37 ℃ температурт 4 цагийн турш хэрэглэхэд агароз гель электрофорезээр тодорхойлогддог задрал үүсэхгүй.
Бактерийн Эндотоксин:LAL-тест, Хятадын фармакопейн IV 2020 оны хэвлэлд заасны дагуу гель хязгаарлах туршилтын арга, ерөнхий дүрэм (1143).Бактерийн эндотоксины агууламж ≤10 ЕС/мг байх ёстой.
Хэрэглэх заавар
1. RNase-гүй хоолойд урвалын уусмалыг доор жагсаасан харьцаагаар бэлтгэнэ.
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| РНХ | X мкг |
| 10 × DNase I буфер | 1 мкл |
| DNase I, RNase агуулаагүй (5U/μL) | Нэг мкг РНХ-д 1 U |
| ddH2O | 10 мкл хүртэл |
2.37 ℃ 15 минутын турш;
3. Урвалыг зогсоохын тулд төгсгөлийн буфер нэмээд DNase I-г идэвхгүй болгохын тулд 65℃-т 10 минут халаана. Дээжийг дараагийн транскрипцийн туршилтанд шууд ашиглаж болно.
Тэмдэглэл
1.РНХ-ийн нэг мкг тутамд 1U DNase I, эсвэл 1мкг-аас бага РНХ-д 1U DNase I хэрэглэнэ.
2.РНХ-ийг ферментийг идэвхгүйжүүлэх явцад задрахаас хамгаалахын тулд EDTA-г 5 мМ эцсийн концентрацид нэмнэ.
