M-MLV урвуу транскриптаза
RevScript урвуу транскриптазыг генетикийн инженерчлэлийн технологиор олж авдаг.Энэ нь илүү өндөр cDNA синтезийн чадвартай, дулааны тогтвортой байдал, урвалын температурын хязгаартай (60 ° C хүртэл).Синтез хийсэн cDNA бүтээгдэхүүн нь 10 кб хүртэл.Энэ нь загваруудын ойр дотно байдлыг сайжруулж, нарийн төвөгтэй хоёрдогч бүтэцтэй эсвэл бага хуулбар гентэй РНХ загваруудыг урвуу хуулбарлахад тохиромжтой.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | HC2003 Б-01 (10,000U) | HC2003 Б-02 (5*10,000U) | HC2003 Б-03 (200,000U) |
| RevScript урвуу транскриптаза (200U/μL) | 50 мкл | 5х50 мкл | 1 мл |
| 5 × RevScript буфер | 250 мкл | 1.25 мл | 5 мл |
Хадгалах нөхцөл
Энэ бүтээгдэхүүнийг -25°C~-15°C хэмд 2 жил хадгална.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь Oligo(dT)-ийг праймер болгон ашиглан 1 нмоль dTTP-ийг хүчилд уусдаггүй материалд 37°С-т 10 минутын дотор оруулдаг.
Урвалын тохиргоо
1.РНХ загварын денатураци (Энэ алхам нь сонголттой, РНХ загварын денатураци нь хоёрдогч бүтцийг нээхэд тусалдаг ба энэ нь эхний хэлхээний cDNA-ийн гарцыг сайжруулна.)
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (мкЛ) |
| RNase чөлөөт ddH2O | 13 хүртэл |
| Олиго(дТ)18 (50 мкмоль/л) эсвэл санамсаргүй праймер (50 мкмоль/л) Эсвэл генийн тусгай праймер (2 мкмоль/л) | 1 |
| эсвэл 1 | |
| эсвэл 1 | |
| РНХ загвар | Xa |
Тэмдэглэл:
1) a: Нийт РНХ: 1-5 ug эсвэл мРНХ: 1-500 нг
2) 65°С-т 5 минутын турш өсгөвөрлөж, дараа нь мөсөн дээр нэн даруй 2 минутын турш хөргөнө.Урвалын шингэнийг цуглуулахын тулд богино хугацаанд центрифуг хийж, дараах хүснэгтэд үзүүлсэн шиг урвуу транскрипцийн урвалын уусмал нэмнэ.Зөөлөн пипеткээр холино.
1. Урвалын хольц бэлтгэх (20 мкл эзэлхүүн)
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (мкЛ) |
| Өмнөх алхамын холимог | 13 |
| 5 × буфер | 4 |
| dNTP холимог (10нмоль/л) | 1 |
| Урвуу транскриптаза (200 U/μL) | 1 |
| RNase дарангуйлагч (40 U/μL) | 1 |
1.Дараах нөхцөлд хариу үйлдэл хийнэ.
| Температур (°C) | Цаг хугацаа |
| 25 ° Ca | 5 мин |
| 42 ° Cb | 15-30 минут |
| 85 ° Cc | 5 мин |
Тэмдэглэл:
1) а.Зөвхөн санамсаргүй гексамер ашиглахад 25°С-т 5 минутын турш өсгөвөрлөх шаардлагатай.Oligo (dT) ашиглах үед энэ алхамыг алгасана уу.18эсвэл генийн өвөрмөц праймер.
2) б.Санал болгож буй урвуу транскрипцийн температур нь 42 ° C байна. Нарийн төвөгтэй хоёрдогч бүтэцтэй эсвэл өндөр GC агууламжтай загваруудын хувьд урвалын температурыг 50-55 ° C хүртэл нэмэгдүүлэхийг зөвлөж байна.
3) в.Урвуу транскриптазыг идэвхгүй болгохын тулд 85 ° C-т 5 минутын турш халаана.
4) Бүтээгдэхүүнийг ПГУ эсвэл qPCR урвалд шууд хэрэглэж болно, эсвэл богино хугацаанд хадгалах зорилгоор -20 ° C-д хадгалж болно.Бүтээгдэхүүнийг хольж, удаан хугацаагаар хадгалахын тулд -80 хэмд хадгалахыг зөвлөж байна.Байнга хөлдөөх гэсгээхээс зайлсхий.
5) Бүтээгдэхүүн нь нэг шатлалт RT-qPCR-д тохиромжтой, 25μL урвалын систем бүрт 10-20 U урвуу транскриптаза нэмэх эсвэл бодит нөхцөл байдлын дагуу урвуу транскриптазын хэмжээг аажмаар нэмэгдүүлэхийг зөвлөж байна.
Тэмдэглэл
1.Туршилтын талбайг цэвэр байлгана уу;Ашиглалтын явцад цэвэр бээлий, маск өмсөх ёстой.Туршилтанд ашигласан бүх материал RNase-ийн бохирдлоос сэргийлэхийн тулд RNase агуулаагүй байх ёстой.
2.РНХ задрахаас сэргийлэхийн тулд бүх процедурыг мөсөн дээр хийх ёстой.
3. Өндөр чанарын РНХ дээжийг урвуу транскрипцийн өндөр үр ашгийг хангахыг зөвлөж байна.
4. Энэ бүтээгдэхүүн нь зөвхөн судалгаанд зориулагдсан.
5.Аюулгүй байдлын үүднээс лабораторийн цув, нэг удаагийн бээлийтэй ажиллана уу.
