Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Тодорхойлолт
Муур дугаар: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix нь загвар болгон РНХ дээр суурилсан мультиплекс тоон ПГУ-ын иж бүрдэл юм.Туршилтанд урвуу транскрипц болон тоон ПГУ-ыг нэг урвалын хоолойд хийж, туршилтын ажиллагааг хялбарчилж, бохирдлын эрсдлийг бууруулдаг.Буфер ба ферментийн хольцын өвөрмөц дизайныг нэг шатлалт лиофилижүүлсэн системд ашиглаж болно.Энэхүү иж бүрдэл нь халуунд тэсвэртэй урвуу транскриптазыг ашиглан тоон олшруулалтад халуун эхлэлийн Taq ДНХ полимераза ашиглан эхний хэлхээний cDNA-г үр дүнтэй нийлэгжүүлэхэд ашигладаг.Энэ нь оновчтой урвалын буфер, ферментийн холимог гэх мэтийг агуулсан ба өвөрмөц бус ПГУ-ын олшруулалтыг үр дүнтэй дарангуйлж, олон qPCR урвалын олшруулалтын үр ашгийг нэмэгдүүлэх хүчин зүйлсийг нэмсэн бөгөөд праймеруудын олшруулалтын үр ашгийг хангахын зэрэгцээ олон тооны флюресценцийн тоон олшруулалтыг идэвхжүүлдэг.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Нэр |
| 1. Лио-буфер |
| 2. Лио-ферментийн холимог |
| 3. Лио хамгаалалтын бодис |
Тээврийн нөхцөлион
Х: Лио-буфер ба хамгаалалтын бодис: -25~-15℃, хадгалах хугацаа 1 жил.
Б: Лио-ферментийн холимог, 2-8 ℃, хадгалах хугацаа 6 сар.
Ашиглалтын заавар
1. Урвалын систем (Жишээ нь 25μL авна уу)
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн концентраци |
| Лио-буфер | 6 | 1* |
| Лио-ферментийн холимог | 1 | - |
| Лио-хамгаалагч | 8 | - |
| Праймер хольц (10μM) | 1 | 0.1- 1uM |
| Сорьцын холимог (10μM) | 0.5 | 0.05-0.5uM |
| РНХ загвар | 5 | - |
| DEPC H2O | 25 хүртэл | - |
2. Оновчтой дугуйн протокол
1) Стандарт дугуйн протокол
| Урвалын үе шат | Температур | Цаг хугацаа | Цикл | |
| 1 | Урвуу хуулбар | 50°Ca | 10мин | 1 |
| 2 | Анхны денатураци | 95°С | 5мин | 1 |
| 3 | Олшруулах урвал | 95°С | 15 сек | 45 мөчлөг |
| 60°Cb | 30 секундc |
2) Хурдан дугуйн протокол
|
| Урвалын үе шат | Температур | Цаг хугацаа | Цикл |
| 1 | Урвуу хуулбар | 50°Ca | 2мин | 1 |
| 2 | Анхны денатураци | 95°С | 2сек | 1 |
| 3 | Олшруулах урвал | 95°С | 1сек |
45 мөчлөг |
| 60°Cb | 13 секундc |
Жич:
a) Урвуу транскрипци: Температурыг 10-15 минутын турш 42°C эсвэл 50°C-г сонгож болно.
b) Олшруулах урвал: Температурыг зохион бүтээсэн праймеруудын Tm утгын дагуу тохируулна.
в)Флюресцент дохио олж авах: -ийн шаардлагын дагуу туршилтын горимыг тохируулна уухэрэгслийн гарын авлага.
Техникийн мэдээлэл/Үзүүлэлтүүд
| Халуун эхлэл | Баригдсан халуун эхлэл |
| Илрүүлэх арга | Праймер-датчик илрүүлэх |
| ПГУ-ын арга | Нэг алхам RT-qPCR |
| Дээжийн төрөл | РНХ |
Тэмдэглэл
1. Энэхүү бүтээгдэхүүн нь зөвхөн судалгааны зориулалттай.
2. Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлаа хангахын тулд лабораторийн цув, бээлий гэх мэт шаардлагатай ХХХ-ийг өмсөнө үү!
