Rnase A
Рибонуклеаза А (RNaseA) нь 13.7 кДа орчим молекул жинтэй 4 дисульфидын холбоо агуулсан нэг судалтай полипептид юм.RNase A нь C ба U үлдэгдэлд нэг судалтай РНХ-г задалдаг эндорибонуклеаз юм.Тодруулбал, хуваагдал нь нуклеотидын 5′-рибоз болон зэргэлдээх пиримидины нуклеотидын 3′-рибоз дээрх фосфатын бүлгээс үүссэн фосфодиэстерийн холбоог таних ба ингэснээр 2, 3′-Циклийн фосфатууд харгалзах 3-д гидролиз болно. ′нуклеозидын фосфатууд (жишээ нь pG-pG-pC-pA-pG нь RNase A-аар хуваагдаж pG-pG-pCp ба A-PG үүсгэдэг).RNase A нь нэг судалтай РНХ-г задлахад хамгийн идэвхтэй байдаг.Санал болгож буй ажлын концентраци нь янз бүрийн урвалын системтэй нийцдэг 1-100μG/мл байна.Давсны бага концентраци (0-100 мМ NaCl) нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийзжүүлэлтийн үр дүнд үүссэн нэг хэлхээтэй РНХ, хоёр хэлхээтэй РНХ, РНХ-ийн гинжийг таслахад ашиглаж болно.Гэсэн хэдий ч давсны өндөр концентрацид (≥0.3 М) RNase A нь зөвхөн нэг судалтай РНХ-г задалдаг.
RNase A нь плазмидын ДНХ эсвэл геномын ДНХ бэлтгэх явцад РНХ-г арилгахад ихэвчлэн ашиглагддаг. Бэлтгэх явцад DNase идэвхтэй байгаа эсэхээс үл хамааран урвалд амархан нөлөөлдөг.Усан халаагуурт буцалгах уламжлалт аргыг DNase идэвхгүй болгоход ашиглаж болно.Энэ бүтээгдэхүүн нь DNase болон протеаз агуулаагүй бөгөөд хэрэглэхийн өмнө дулааны боловсруулалт шаарддаггүй.Нэмж дурдахад энэ бүтээгдэхүүнийг RNase хамгаалалтын шинжилгээ, РНХ-ийн дарааллын шинжилгээ зэрэг молекул биологийн туршилтуудад ашиглаж болно.
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг -25～-15℃ хэмд 2 жил хадгалах боломжтой.
Зааварчилгаа
Энэ нь RNase A хадгалах уусмал бэлтгэх нийтлэг аргуудын нэг юм.Үүнийг мөн бэлтгэж болноЛаборатори эсвэл лавлах ном зохиол дахь уламжлалт аргуудын дагуу бусад аргууд (жишээ нь10 мМ Tris-HCl, рН 7.5 эсвэл Tris-NaCl уусмалд шууд уусдаг)
1. 10 мг/мл RNase A хадгалах уусмал бэлтгэхийн тулд 10 мм натрийн ацетат (рН 5.2) ашиглана.
2. 100 ℃-т 15 минут халаана
3. Өрөөний температур хүртэл хөргөж, 1/10 эзэлхүүнтэй 1 М Tris-HCl (рН 7.4) нэмээд рН-ийг 7.4 болгож тохируулна (хэрэглэхийн тулд).жишээ нь, 500 мл 10г/мл RNase хадгалах уусмал 1M Tris-HCL, PH7.4 нэмнэ)
4. Хөлдөөсөн хадгалах зориулалттай -20℃-т савласан, 2 жил хүртэл хадгална.
[Тэмдэглэл]: RNaseA уусмалыг төвийг сахисан нөхцөлд буцалгахад RNase хур тунадас үүснэ;Үүнийг бага рН-д буцалгаж, хэрэв хур тунадас байгаа бол уургийн хольц байгаатай холбоотой байж болох юм.Буцалсны дараа тунадас олдвол хольцыг өндөр хурдтай центрифуг (13000 эрг/мин) аргаар зайлуулж, дараа нь хөлдөөх зориулалтаар савлаж болно.
Бүтээгдэхүүний мэдээлэл
| Синоним | Рибонуклеаз I;Нойр булчирхайн рибонуклеаз;Рибонуклеаз 3'-пиримидноолигонуклеотидохидролаза;Rnase A;Эндорибонулцеаз I |
| CAS дугаар | 9001-99-4 |
| Гадаад төрх | Лиофильжүүлсэн цагаан нунтаг |
| Молекулын жин | ~ 13.7кДа (амин хүчлийн дараалал) |
| Ph утга | 7.6 (үйл ажиллагааны хүрээ 6-10) |
| Тохиромжтой температур | 60℃ (Үйл ажиллагааны хүрээ 15-70℃) |
| Идэвхжүүлэгч агент | Na2+.К+ |
| Дарангуйлагч | Rnase дарангуйлагч |
| Идэвхгүй болгох арга | Халаахад идэвхгүйжүүлэх боломжгүй тул центрифугийн баганыг ашиглахыг зөвлөж байна |
| Гарал үүсэл | Үхэр |
| Уусах чадвар | Усанд уусдаг (10мг/мл) |
| Хуурай дээр алдагдал | ≤5.0% |
| Ферментийн үйл ажиллагаа | ≥60 Куницын нэгж/мг |
| Изоэлектрик цэг | 9.6 |
Тэмдэглэл
Аюулгүй байдал, эрүүл мэндээ хамгаалахын тулд лабораторийн цув, нэг удаагийн бээлий өмс.
