One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Муур дугаар: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) нь РНХ-ийг загвар болгон (РНХ вирус гэх мэт) ашиглан нэг плекс эсвэл мультиплекс тоон ПГУ-д тохиромжтой датчик дээр суурилсан RT-qPCR хурдан илрүүлэх хэрэгсэл юм.Энэ бүтээгдэхүүн нь шинэ үеийн эсрэгбиеээр өөрчилсөн Так ДНХ Полимераз ба нэг шатлалт тусгай урвуу транскриптазыг ашигладаг бөгөөд хурдан олшруулахад зориулсан оновчтой буфертэй, олшруулалтын хурд нь илүү, өсгөлтийн үр ашиг, өвөрмөц чанар өндөр байдаг.Энэ нь богино хугацаанд бага ба өндөр концентрацитай дээжийн дан болон олон талт аль алинд нь тэнцвэртэй өсгөлтийг дэмждэг.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
1. 5×RT-qPCR буфер (U+)
2. Ферментийн холимог (U+)
Тэмдэглэл:
а.5×RT-qPCR буфер (U+) нь dNTP болон Mg-г агуулдаг2+;
б.Ферментийн холимог (U+) нь урвуу транскриптаза, Халуун эхлэл Так ДНХ полимераза, RNase дарангуйлагч ба UDG;
в.RNase-Free зөвлөмж, EP хоолой гэх мэтийг ашигла.
Хэрэглэхийн өмнө 5×RT-qPCR буферийг (U+) сайтар холино.Хэрэв гэссэний дараа хур тунадас унавал буферийг тасалгааны температурт буцаан хүлээж, хольж, уусгаж, дараа нь тэдгээрийг хэвийн байдлаар хэрэглэнэ.
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг хуурай мөстэй хамт тээвэрлэж -25~-15℃ хэмд 1 жил хадгалах боломжтой.
Зааварчилгаа
1. Урвал Систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (20 мкл хариу үйлдэл) |
| 2 ×RT-qPCR буфер | 4 мкл |
| Ферментийн холимог (U+) | 0.8 мкл |
| Праймер Форвард | 0.1~ 1.0μM |
| Праймер урвуу | 0.1~ 1.0μM |
| TaqMan шалгалт | 0.05~0.25μM |
| Загвар | X мкл |
| RNase-гүй ус | 25 мкл хүртэл |
Тайлбар: Урвалын хэмжээ 10-50μL.
2. Унадаг дугуйн протокол (Сстандарт)
| Цикл алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Урвуу транскрипци | 55 ℃ | 10 мин | 1 |
| Анхны денатураци | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Денатураци | 95 ℃ | 10 сек | 45 |
| Хагалах/өргөтгөх | 60 ℃ | 30 сек |
| Дугуйн протокол (хурдан) Цикл алхам |
Температур. |
Цаг хугацаа |
Цикл |
| Урвуу транскрипци | 55 ℃ | 5 мин | 1 |
| Анхны денатураци | 95 ℃ | 5 с | 1 |
| Денатураци | 95 ℃ | 3 с | 43 |
| Хагалах/өргөтгөх | 60 ℃ | 10 с |
Тэмдэглэл:
а.Урвуу транскрипцийн температур 50 ℃-аас 60 ℃ хооронд байна, температурыг нэмэгдүүлэх нь нарийн төвөгтэй бүтэц, өндөр CG агууламжийн загваруудыг нэмэгдүүлэхэд тусалдаг;
б.Праймерын Tm утга дээр үндэслэн хамгийн оновчтой температурыг тохируулах шаардлагатай бөгөөд бодит цагийн ПГУ-ын багаж дээр үндэслэн флюресценцийн дохио цуглуулах хамгийн богино хугацааг сонгох хэрэгтэй.
Тэмдэглэл
Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлыг хангах үүднээс лабораторийн цув, бээлий гэх мэт шаардлагатай ХХХ-ийг өмсөнө үү!
