Фосфатазын шүлтлэг (ALP)
Тодорхойлолт
Шүлтлэг фосфатаза нь TAB5 генийг агуулсан рекомбинант E. coli омогоос гаралтай.Фермент нь ДНХ ба РНХ фосфомоноэфирийн 5´ ба 3´ төгсгөлийн фосфоржилтыг хурдасгадаг.Мөн рибоз, түүнчлэн дезоксирибонуклеозид трифосфатыг (NTPs ба dNTPs) гидролиз болгодог.TAB5 шүлтлэг фосфатаза нь 5´ цухуйсан, 5´ хонхорхой, мохоо үзүүрт ажилладаг.Фосфатаза нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн фосфоржуулсан төгсгөлийг арилгахын тулд клончлох эсвэл датчикийн төгсгөлийн шошгололт гэх мэт олон молекул биологийн хэрэглээнд ашиглаж болно.Клончлох туршилтуудад фосфоржилт нь шугаманжуулсан плазмидын ДНХ-ийг өөрөө холбодоггүй.Энэ нь мөн ДНХ-ийн дараалалд зориулж загвар бэлтгэхийн тулд ПГУ-ын урвал дахь нэгдээгүй dNTP-ийг доройтуулж чадна.70°С-т 5 минутын турш халаахад фермент бүрэн бөгөөд эргэлт буцалтгүй идэвхгүй болдог тул холбохоос өмнө фосфатазыг зайлуулах эсвэл төгсгөлийн шошго хийх шаардлагагүй болгодог.
Хэрэглээ
1. Шүлтлэг фосфатаз нь уурагтай (эсрэгбие, стрептавидин гэх мэт) хосолсон нь зорилтот молекулуудыг тусгайлан тодорхойлох боломжтой бөгөөд ELISA, WB болон гистохимийн илрүүлэхэд ашиглаж болно;
2. Шүлтлэг фосфатазыг ДНХ эсвэл РНХ-ийн 5 '-терминалыг фосфоргүйжүүлэхэд ашиглаж, өөрийгөө холбохоос сэргийлж болно;
3.Дээрх фосфоргүйжүүлсэн ДНХ эсвэл РНХ-ийг радио шошготой фосфатаар (Т4 поли-нуклеотид киназаар) тэмдэглэж болно.
Химийн бүтэц
Тодорхойлолт
| Туршилтын зүйлс | Үзүүлэлтүүд |
| Ферментийн үйл ажиллагаа | 5U / мкл |
| Эндонуклеазын үйл ажиллагаа | Илрүүлээгүй |
| Экзонуклеазын үйл ажиллагаа | Илрүүлээгүй |
| Ник хийх үйл ажиллагаа | Илрүүлээгүй |
| RNase үйл ажиллагаа | Илрүүлээгүй |
| E.coli ДНХ | ≤1хуулбар/5U |
| Эндотоксин | LAL-Тест, ≤10EU/мг |
| Цэвэр байдал | ≥95% |
Тээвэрлэлт, хадгалалт
Тээвэр:Хүрээлэн буй орчин
Хадгалах:2-8 хэмийн температурт хадгална
Дахин туршилт хийхийг зөвлөж байнаАмьдрал:2 жил
