RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Энэ бүтээгдэхүүн нь урвалын буфер, RT-ферментийн холимог (Bst ДНХ полимераз ба халуунд тэсвэртэй урвуу транскриптаза), лиофильжүүлсэн хамгаалалтын бодис, хромоген будгийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг.Ашиглахын тулд зүгээр л буфер, урвалын фермент, праймерыг хольж, загварт нэмнэ;Лиофильжүүлсэн хамгаалалтын бодис нэмэх нь шулуун байж болно.Энэ нь лиофилизатортой холбогдож, лиофилжуулсан бөгөөд хэрэглэх үед зөвхөн праймер болон загваруудыг нэмсэн.Энэхүү иж бүрдэл нь олшруулалтыг хурдан, тодорхой нүдээр илрүүлэх боломжийг олгодог бөгөөд сөрөг урвалыг улаанаар, эерэг урвалыг шар болгон өөрчилснөөр зааж өгдөг.
Бүрэлдэхүүн хэсэг
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Гогцоонд зуучлагдсан олшруулах буфер (будагтай) | 0.96 мл | 4.80 мл × 2 | 9.60 мл × 10 |
| RT-ферментийн холимог | 270 мкл | 2.70 мл | 2.70 мл × 10 |
| Лиофильжүүлсэн хамгаалалтын бодис | 0.96 мл × 2 | 9.60 мл × 2 | 9.60 мл × 20 |
Хэрэглээ
ДНХ эсвэл РНХ-ийн изотермийн олшруулалтад зориулагдсан.
Хадгалах нөхцөл
Хуурай мөстэй хамт тээвэрлэж, -25~ -15℃ хэмд хадгална.Байнга хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхий, бүтээгдэхүүн нь 12 сарын хугацаанд хүчинтэй.
Протокол
1.Өрөөний температурт хэрэглэх урвалын буферийг гэсгээнэ.Хоолойг богино хугацаанд эргүүлэх буюу хэд хэдэн удаа эргүүлж сайтар хольж, дараа нь центрифуг хийж шингэнийг хоолойн ёроолд цуглуулна.
2.Урвалын системийг бэлтгэх.Энэ урвалжийг хоёр урвалын систем, шингэний урвалын холимог болон лиофилжсэн системийн хольцоор бэлтгэж болно.
1) Шингэн урвалын хольц бэлтгэнэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| Гогцоонд зуучлагдсан олшруулах буфер (будагтай) | 10 мкл |
| RT-ферментийн холимог | 2.8 мкл |
| 10 × Праймер хольцa | 5 мкл |
| ДНХ/РНХ загварууд b | × μл |
| Нуклеазгүй ус | 50 мкл хүртэл |
2) Лиофилизацийн системийн холимог
① Лиофилжсэн хольц бэлтгэнэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| Гогцоонд зуучлагдсан олшруулах буфер (будагтай) | 10 мкл |
| Лиофильжүүлсэн хамгаалалтын бодис | 20 мкл |
| RT-ферментийн холимог | 2.8 мкл |
| Нуклеазгүй ус | 50 мкл хүртэл |
② Лиофилизаци: Бэлтгэсэн хольцыг 50μL системд лиофилжуулсан
③ Урвалын хольц бэлтгэнэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| Лиофильжүүлсэн холимог | 1 ширхэг |
| 10 × Праймер хольцa | 5 мкл |
| ДНХ/РНХ загварууд b | × μл |
| Нуклеазгүй ус | 50 мкл хүртэл |
Тэмдэглэл:
1) а.10×Праймер хольц: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM гогцоо F/B;
2) б.DEPC (усанд уусдаг) -ийг нуклейн хүчилд хэрэглэхийг зөвлөж байна.
1.65°С-т 30-45 минутын турш өсгөвөрлөх ба энэ хугацааг өнгөний өөрчлөлтийн дагуу зохих ёсоор сунгаж болно.
2.Энгийн нүдээр харахад шар нь эерэг, улаан нь сөрөг байв.
Тэмдэглэл
1.Буфер хоолойн ёроолд давс гарч, тасалгааны температурт сайтар холихын тулд хоолойг богино хугацаанд эргүүлж эсвэл хэд хэдэн удаа эргүүлж болно.
2.Урвалын температурыг праймерын нөхцөл байдлаас шалтгаалан 62 ℃-аас 68 ℃ хооронд оновчтой болгож болно.
3.Савласан урвалжуудыг агаарт удаан байлгаж болохгүй.
4.Улаан ба шар өнгө өөрчлөгдөх урвал нь урвалын системийн рН-ийн өөрчлөлтөөс хамаардаг тул ddH хэрэглэхийг зөвлөсөн Tris нуклейн хүчил агуулсан уусмалыг бүү хэрэглээрэй.2O хадгалсан нуклейн хүчил;
5.Туршилтыг стандартчилсан байх ёстой, үүнд урвалын системийг бэлтгэх, лиофилизаци хийх, дээж боловсруулах, дээж нэмэх үйл явц;
6.Бохирдлоос зайлсхийхийн тулд урвалын системийг хэт цэвэрхэн вандан сандал дээр бэлтгэхийг зөвлөж байна, бусад хэсэгт хуурамч эерэг хөндлөнгийн оролцооноос зайлсхийхийн тулд өрөөний утааны бүрээсэнд загвар нэмж оруулахыг зөвлөж байна.
