Дээж ялгаруулах урвалж
Дээж ялгаруулах урвалж нь молекулын POCT оношлогооны хувилбаруудад зориулагдсан.Шууд олшруулах LAMP ба шууд олшруулах ПГУ-ын хоёр системийн хувьд нуклейн хүчлийг олборлох шаардлагагүй.Дээжний түүхий лизатыг шууд олшруулж, зорилтот генийг нарийн илрүүлж, дээж илрүүлэх хугацааг улам богиносгож, молекулын POCT-ийн хэрэглээний шаардлагад бүрэн нийцдэг.Энэ нь хамрын арчдас, хоолойн арчдас болон бусад төрлийн сорьцонд тохиромжтой.Боловсруулсан дээжийг бодит цагийн флюресценцийн тоон ПГУ эсвэл LAMP илрүүлэхэд шууд ашиглах боломжтой бөгөөд нуклейн хүчлийн нарийн төвөгтэй олборлолтын ажиллагаагүйгээр уламжлалт олборлох аргуудтай ижил үр дүнд хүрч болно.
Хадгалах нөхцөл
Өрөөний температурт тээвэрлэж, хадгална.
Чанарын шалгалт
Функциональ илрүүлэлт – тоон qPCR: 800μl дээж ялгаруулах урвалжийн системийг олшруулсан.
1000 хувь шинэ псевдовирус, хамрын арчдас нэг дээж, үр дүнд нь ижил төстэй олшруулалтын муруй болон± 0.5 Ct доторх ΔCt утгууд.
Туршилтын журамres
1. 800 мкл дээж ялгаруулах урвалж авч, задралын уусмалыг 1.5 мл дээж авах хоолойд тараана.
2. Хамрын арчдас эсвэл хоолойноос арчдасыг арчдастай хамт авна; Хамрын арчдасаас дээж авах журам: ариутгасан арчдасыг авч хамрын нүхэнд хийж, 1.5 см орчим гүн рүү аажмаар урагшлуулж, хамрын салст бүрхэвчийг 15 секундээс дээш хугацаанд 4 удаа зөөлөн эргүүлнэ. , дараа нь ижил арчдастай бусад хамрын хөндийд ижил үйлдлийг давтан хийнэ. Хоолойн арчдасаас дээж авах журам: ариутгасан арчдасыг авч зөөлөн, хурдан залгиурын гүйлсэн булчирхай болон арын залгиурын ханыг 3 удаа арчина.
3.Арчдасыг нэн даруй дээж авах хоолойд хийнэ.Арчдасны толгойг эргүүлж, дээжийг дээж авах хоолойд бүрэн шүүж авахын тулд дор хаяж 30 секундын турш хадгалах уусмалд холино.
4. Өрөөний температурт (20~25℃) 1 минутын турш өсгөвөрлөж, задралын буфер бэлтгэж дуусна.
5. 25μl системийн RT-PCR болон RT-LAMP хоёулаа илрүүлэх туршилтад зориулж 10μl хэмжээтэй загвар нэмэлттэй нийцэж байсан.
Тэмдэглэл
1. Нэг арчдастай тохирох дээжийн шууд лизатын хамгийн бага хэмжээг 400μl болгож тохируулах боломжтой бөгөөд үүнийг туршилтын хэрэгцээнд тохируулан тохируулж болно.
2. Дээжийг ялгаруулах урвалжаар боловсруулсны дараа туршилтын дараагийн үе шатыг аль болох хурдан хийхийг зөвлөж байна, хүлээх хугацаа нь 1 цагаас бага байна.
3. Дээжийн лизатын рН нь хүчиллэг бөгөөд илрүүлэх систем нь тодорхой буфертэй байх шаардлагатай.Энэ нь рН буфер бүхий ихэнх ПГУ, RT-ПГУ болон LAMP флюресцент илрүүлэхэд тохиромжтой боловч буфергүйгээр LAMP колориметр илрүүлэхэд тохиромжгүй.
