Вирусын ДНХ/РНХ олборлох хэрэгсэл
Энэхүү иж бүрдэл нь хамар залгиурын арчдас, хүрээлэн буй орчны арчдас, эсийн өсгөвөрийн супернатант, эд эсийн нэгэн төрлийн супернатант зэрэг дээжээс өндөр цэвэршилттэй вирусын ДНХ/РНХ-ийг хурдан гаргаж авахад тохиромжтой.Энэхүү иж бүрдэл нь фенол/хлороформын органик уусгагчийг ашиглах, эсвэл өндөр чанартай вирусын ДНХ/РНХ-г гаргаж авахын тулд цаг хугацаа шаардсан спиртийн тунадасыг ашиглах шаардлагагүй болсон цахиурын мембран цэвэршүүлэх технологи дээр суурилдаг.Олж авсан нуклейн хүчлүүд нь ямар ч хольцгүй бөгөөд урвуу транскрипц, ПГУ, RT-ПГУ, бодит цагийн ПГУ, дараагийн үеийн дараалал (NGS), Northern blot зэрэг доод туршилтуудад ашиглахад бэлэн байдаг.
Хадгалах нөхцөл
15 ~ 25 хэмд хадгалж, тасалгааны температурт тээвэрлэнэ
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | 100RXNS |
| Буфер VL | 50 мл |
| RW буфер | 120 мл |
| RNase агуулаагүй ddH2 O | 6 мл |
| FastPure РНХ-ийн багана | 100 |
| Цуглуулгын хоолой (2 мл) | 100 |
| RNase агуулаагүй цуглуулгын хоолой (1 .5 мл) | 100 |
Буфер VL:Лизис болон холбох орчинг бүрдүүлэх.
RW буфер:Үлдэгдэл уураг болон бусад хольцыг зайлуулна.
RNase агуулаагүй ddH2O:Эргэлтийн баганад мембранаас ДНХ/РНХ-г шүүж авна.
FastPure РНХ багана:Ялангуяа ДНХ/РНХ шингээх.
Цуглуулгын хоолой 2 мл:Шүүлтүүрийг цуглуул.
RNase агуулаагүй цуглуулгын хоолой 1.5 мл:ДНХ/РНХ цуглуулах.
Хэрэглээ
Хамар залгиурын арчдас, хүрээлэн буй орчны арчдас, эсийн өсгөвөрийн дээд давхарга, эд эсийн нэгэн төрлийн супернатант.
Өөрөө бэлтгэсэн Materials
RNase-гүй пипеткийн үзүүр, 1.5 мл RNase-гүй центрифугийн хоолой, центрифуг, эргүүлэг холигч, пипетк.
Туршилтын үйл явц
Дараах бүх алхмуудыг биоаюулгүйн кабинетад хийнэ.
1. 200 мкл дээжийг RNase агуулаагүй центрифугийн хоолойд хийнэ (дээж хангалтгүй бол PBS эсвэл 0.9% NaCl-ээр дүүргэнэ), 500 мкл Buffer VL нэмээд 15 – 30 секунд эргүүлж сайтар хольж, центрифуг хийнэ. хоолойн ёроолд хольцыг цуглуулахын тулд богино хугацаанд .
2. FastPure РНХ баганыг 2 мл-ийн цуглуулгын хоолойд хийнэ.Хольцыг 1-р алхамаас FastPure РНХ-ийн багана руу шилжүүлж, 12,000 эрг / мин (13,400 × г) хурдаар центрифуг хийж, шүүсэн бодисыг устгана.
3. FastPure RNA Columns-д 600 мкл Buffer RW нэмээд 12,000 rpm (13,400 × g) хурдаар 30 секундын турш центрифуг хийж, шүүсэн бодисыг устгана.
4. 3-р алхамыг давт.
5. Хоосон баганыг 12,000 эрг/мин (13,400 × г) хурдаар 2 минутын турш центрифуг хийнэ.
6. FastPure РНХ-ийн багануудыг RNase-гүй шинэ цуглуулгын хоолой руу 1.5 мл (иж бүрдэлд өгсөн) болгоомжтой шилжүүлж, баганад хүрэлгүйгээр мембраны төвд 30-50 мкл RNase-гүй ddH2O нэмнэ.Өрөөний температурт 1 минут байлгаад 12,000 эрг / мин (13,400 × г) 1 минутын турш центрифуг хийнэ.
7. FastPure РНХ баганыг устгана уу.ДНХ/РНХ-ийг дараагийн шинжилгээнд шууд ашиглах, эсвэл -30~ -15°С-т богино хугацаанд эсвэл -85~-65°С-т удаан хугацаагаар хадгалах боломжтой.
Тэмдэглэл
Зөвхөн судалгааны зориулалттай.Оношлогооны процедурт ашиглахгүй.
1. Дээжийг өрөөний температурт урьдчилан тэнцвэржүүлнэ.
2. Вирус нь маш халдвартай байдаг.Туршилтын өмнө шаардлагатай бүх аюулгүй байдлын урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээг авсан эсэхийг шалгана уу.
3. Дээжийг дахин хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхий, учир нь энэ нь гаргаж авсан вирусын ДНХ/РНХ-ийн задрал, гарц буурахад хүргэдэг.
4. Өөрөө бэлтгэсэн төхөөрөмжид RNase-гүй пипеткийн үзүүр, 1.5 мл RNase-гүй центрифугийн хоолой, центрифуг, эргүүлэг холигч, пипетк орно.
5. Иж бүрдлийг ашиглахдаа лабораторийн цув, нэг удаагийн латекс бээлий, нэг удаагийн маск өмсөж, RNase-ээр бохирдох эрсдэлийг багасгахын тулд RNase агуулаагүй материал хэрэглээрэй.
6. Өөрөөр заагаагүй бол өрөөний температурт бүх алхмуудыг гүйцэтгэнэ.
Механизм ба ажлын урсгал
