Халуун эхлэл Bst 2.0 ДНХ Полимераз (Глицеролгүй)
Bst ДНХ полимераза V2 нь Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I-ээс гаралтай бөгөөд 5′→3′ ДНХ полимераза идэвхжилтэй, гинжийг орлуулах хүчтэй боловч 5′→3′ экзонуклеазын идэвхжилгүй.Bst DNA Polymerase V2 нь хэлхээний шилжилт, изотерм өсгөлтийн LAMP (Loop mediated isothermal amplification) болон хурдан дараалалд нэн тохиромжтой.Bst DNA polymerase V2 нь урвуу өөрчлөлтийн технологиор олж авсан Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) дээр суурилсан халуун эхлүүлэх хувилбар бөгөөд өрөөний температурт ДНХ полимеразын үйл ажиллагааг дарангуйлж чаддаг тул урвалын системийг өрөөний температурт ажиллуулж, боловсруулж болохгүй. -тусгай олшруулалт, урвалын үр ашгийг дээшлүүлэх ба энэ хувилбарыг лиофилизаци хийх боломжтой.Үүнээс гадна түүний үйл ажиллагаа нь өндөр температурт ялгардаг тул тусдаа идэвхжүүлэх алхам хийх шаардлагагүй болно.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ДНХ полимераз V2 (Глицерол агуулаагүй)(8U/μL) | 0.2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфер | 1.5 мл | 2 × 1.5 мл | 3х10 мл |
| MgSO4(100 мм) | 1.5 мл | 2 × 1.5 мл | 2 × 10 мл |
Хэрэглээ
1.LAMP изотермийн олшруулалт
2.ДНХ-ийн хэлхээний нэг шилжилтийн урвал
3.Өндөр GC генийн дараалал
4.Нанограмм түвшний ДНХ-ийн дараалал.
Хадгалах нөхцөл
0°С-аас доош температурт тээвэрлэж, -25°C~-15°C хэмд хадгална.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь 65°С-т 30 минутын дотор 25 нмоль dNTP-ийг хүчилд уусдаггүй материалд оруулах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Чанарын шалгалт
1.Уургийн цэвэр байдлын шинжилгээ (SDS-PAGE):Bst ДНХ полимераза V2-ийн цэвэршилтийг Coomassie Blue илрүүлэлтийг ашиглан SDS-PAGE шинжилгээгээр ≥99% тодорхойлно.
2.EдонуклеазҮйл ажиллагаа:Доод тал нь 8 U Bst ДНХ полимераза V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1 мкг λДНХ-тэй 37 ℃ температурт 16 цагийн турш инкубацлахад тодорхойлсноор илрэхуйц доройтол гарахгүй.
3.Экзонуклеазын үйл ажиллагаа:Доод тал нь 8 U Bst ДНХ полимераз V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1 мкг λ -Ард Ⅲ задралын ДНХ-ийг 37 ℃ температурт 16 цагийн турш инкубацлахад тодорхойлсноор илрэхуйц доройтол гарахгүй.
4.Никазын үйл ажиллагаа:Хамгийн багадаа 8 U Bst ДНХ полимераза V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1 мкг pBR322 ДНХ-тэй 37°С-т 16 цагийн турш инкубацлахад тодорхойлогдсон шиг задрал илрэхгүй.
5.RNase үйл ажиллагаа:Хамгийн багадаа 8 U Bst ДНХ полимераза V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1.6 мкг MS2 РНХ-тай 37°С-т 16 цагийн турш инкубацлахад илэрсэн задрал байхгүй болно.
6.E. coliДНХ:120 U Bst ДНХ полимераза V2-ийг E. coli геномын ДНХ байгаа эсэхийг E. coli 16S rRNA локусын өвөрмөц праймер бүхий TaqMan qPCR ашиглан шалгана.E. coli геномын ДНХ-ийн бохирдол ≤1 хуулбар байна.
LAMP урвал
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | 25мкЛ |
| 10×HC Bst V2 буфер | 2.5 мкл |
| MgSO4 (100 мм) | 1.5 мкл |
| dNTPs (тус бүр 10мМ) | 3.5 мкл |
| SYTO™ 16 Ногоон (25×)a | 1.0 мкл |
| Праймер хольцb | 6 мкл |
| Bst ДНХ Полимераз V2 (Глицеролгүй) (8 U/uL) | 1 мкл |
| Загвар | × μл |
| ddH₂O | 25 мкл хүртэл |
Тэмдэглэл:
1) а.SYTOTM 16 Ногоон (25×): Туршилтын хэрэгцээний дагуу бусад будагч бодисыг орлуулагч болгон ашиглаж болно;
2) б.Праймерын хольц: 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μ M F3, 2.5 μ M B3, 5 μ M LF, 5 μ M LB болон бусад хэмжээсийг холих замаар олж авна.
Урвал ба нөхцөл байдал
1 × HC Bst V2 буфер, инкубацийн температур 60 ° C-аас 65 ° C хооронд байна.
Дулаан идэвхгүйжүүлэх
80 ° C, 20 минут
