2×ПГУ-ын мастер хольц (будаггүй)
ПГУ-ын Мастер Микс нь Так ДНХ Полимераз, dNTP MgCl2 холимог, оновчтой буфер зэрэг хэрэглэхэд бэлэн нэгэн төрлийн ПГУ-ын урьдчилан хольсон уусмал юм.Урвалын явцад зөвхөн праймер болон загварыг олшруулах зорилгоор нэмж болох бөгөөд энэ нь туршилтын үйл ажиллагааны үе шатыг ихээхэн хялбаршуулдаг.Энэхүү бүтээгдэхүүн нь маш сайн тогтворжуулагч агуулсан бөгөөд 4 хэмд 3 сар хадгалах боломжтой.ПГУ-ын бүтээгдэхүүн нь 3′-дА цухуйсан ба Т вектор руу амархан клончлогдох боломжтой.
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг -25℃~ -15℃ хэмд хоёр жилийн турш хадгална.
Үзүүлэлтүүд
| Үнэнч байдал (Taq эсрэг) | 1× |
| Халуун эхлэл | No |
| Хэт их | 3′-А |
| Полимераз | Так ДНХ полимераз |
| Урвалын формат | SuperMix эсвэл Master Mix |
| Урвалын хурд | Стандарт |
| Бүтээгдэхүүний төрөл | ПГУ-ын мастер холимог (2×) |
Зааварчилгаа
1.Урвалын систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Хэмжээ (μл) |
| ДНХ-ийн загвар | Тохиромжтой |
| Праймер 1 (10 мкмоль/л) | 2 |
| Праймер 2 (10 мкмоль/л) | 2 |
| ПГУ-ын мастер хольц | 25 |
| ddH2O | 50 хүртэл |
2.Олшруулах протокол
| Циклийн алхамууд | Температур (°C) | Цаг хугацаа | Цикл |
| Урьдчилан денатураци | 94 ℃ | 5мин | 1 |
| Денатураци | 94 ℃ | 30 сек | 35 |
| Хатаах | 50-60 ℃ | 30 сек | |
| Өргөтгөл | 72 ℃ | 30-60сек/кб | |
| Эцсийн өргөтгөл | 72 ℃ | 10 мин | 1 |
Тэмдэглэл:
1) Загварын хэрэглээ: 50-200 нг геномын ДНХ;0.1-10 нг плазмидын ДНХ.
2) Mg2+концентраци: Энэ бүтээгдэхүүн нь ихэнх ПГУ-ын урвалд тохиромжтой 3 мМ MgCl2 агуулдаг.
3) Хатаах температур: Праймерын онолын Tm утгыг харна уу.Бэлтгэх температурыг праймерын онолын утгаас 2-5 ℃ бага болгож тохируулж болно.
4) Сунгах хугацаа: Молекулыг тодорхойлохын тулд 30 сек/кб хийхийг зөвлөж байна.Ген клончлоход 60сек/кб ашиглахыг зөвлөж байна.
Тэмдэглэл
1.Аюулгүй байдал, эрүүл мэндээ хамгаалахын тулд лабораторийн цув, нэг удаагийн бээлий өмс.
2.Зөвхөн судалгааны зориулалттай!
