2×PCR Super Mix (Будагтай)
2× ПГУ-ын мастер хольц нь Так ДНХ Полимераз, dNTP болон ПГУ-д шаардлагатай бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг.Мастер Микс нь манай тусгай тогтворжуулагчаар 4℃ хэмд 3 сарын турш тогтвортой байна.Урьдчилан холих уусмалыг ердийн ПГУ-д оновчтой болгож, ДНХ-ийн загвар болон праймерыг нэмснээр хэрэглэхэд бэлэн болсон.ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг урьдчилан ачаалагдсан бромофенолын цэнхэр будгаар электрофорез хийхэд шууд ачаалж болно.Олшруулсан бүтээгдэхүүнүүд нь 3 '-dA цухуйсан хэсгүүдийг агуулдаг бөгөөд Т вектор руу хялбархан хувилах боломжтой.2×PCR Master Mix нь ПГУ-ын процедурыг хялбарчилж, бохирдлыг бууруулдаг.
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг -25℃~-15℃ хэмд 2 жил хадгална.
Үзүүлэлтүүд
| Үнэнч байдал(Taq эсрэг) | 1× |
| Халуун эхлэл | No |
| Хэт их | 3'-А |
| Полимераз | Так ДНХ полимераз |
| Урвалын формат | SuperMix эсвэл Master Mix |
| Урвалын хурд | Стандарт |
| Бүтээгдэхүүний төрөл | ПГУ-ын мастер холимог (2х) |
Зааварчилгаа
1.Урвалын систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн(μл) |
| ДНХ-ийн загвар | Тохиромжтой |
| Праймер 1 (10 мкмоль/л) | 2 |
| Праймер 2 (10 мкмоль/л) | 2 |
| 2 × ПГУ-ын мастер хольц | 25 |
| ddH2O | 50 хүртэл |
2.Олшруулах протокол
| Циклийн алхамууд | Температур (°C) | Цаг хугацаа | Цикл |
| Анхны денатураци | 94 | 5 мин | 1 |
| Денатураци | 94 | 30 сек | 35 |
| Хатаах | 50-60 | 30 сек | |
| Өргөтгөл | 72 | 30-60 сек/кб | |
| Эцсийн өргөтгөл | 72 | 10 мин | 1 |
Жич:
1) Загварын хэрэглээ: 50-200нг геномын ДНХ;0.1-10 нг плазмидын ДНХ.
2) Mg2+концентраци: Энэ бүтээгдэхүүн нь ихэнх ПГУ-ын урвалд тохиромжтой 3мМ MgCl2 агуулдаг.
3) Хатаах температур: Праймерын онолын Tm утгыг харна уу.Бэлтгэх температурыг праймерын онолын утгаас 2-5℃ бага болгож тохируулж болно.
4) Сунгах хугацаа: Молекулыг тодорхойлохын тулд 30 сек/кб хийхийг зөвлөж байна.Генийн клончлолын хувьд 60 сек/кб хийхийг зөвлөж байна.
Тэмдэглэл
1.Полиакриламидын гель электрофорез хийхэд 2 × ПГУ-ын мастер хольц бүхий ПГУ-ын бүтээгдэхүүн тохиромжгүй.
2.Аюулгүй байдал, эрүүл мэндээ хамгаалахын тулд лабораторийн цув, нэг удаагийн бээлий өмс.
3.Энэ нь ЗӨВХӨН судалгааны зориулалтаар ашиглагддаг!
