Multiplex qPCR Probe Premix
Муур дугаар: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) нь өндөр мэдрэмжтэй, өвөрмөц чанараараа тодорхойлогддог, цэнхэр өнгөтэй, дээж нэмэх нөлөөтэй, бодит цагийн 2 × бодит цагийн тоон ПГУ-ын олшруулалтын урьдчилсан уусмал юм.Энэ бүтээгдэхүүн нь нэг урвалын цооногт дөрөв хүртэлх тооны флюресцент тоон ПГУ-ын урвал явуулах боломжийг олгодог 2 × холимог урьдчилан хольсон урвалж юм.Энэхүү бүтээгдэхүүн нь генийн хувьд өөрчилсөн эсрэгбиеийн аргыг агуулсан Taq ферментийг халуун эхлүүлж, өсгөлтийн мэдрэмж, өвөрмөц байдлыг ихээхэн сайжруулдаг.Үүний зэрэгцээ, энэ бүтээгдэхүүн нь олон урвалын буферийг гүн оновчтой болгосон бөгөөд энэ нь урвалын олшруулах үр ашгийг сайжруулж, бага концентрацитай загваруудыг үр дүнтэй өсгөхөд тусалдаг.Энэ бүтээгдэхүүнийг генотип, мультиплекс тоон шинжилгээнд ашиглаж болно.
Тодорхойлолт
| Халуун эхлэл | Баригдсан халуун эхлэл |
| Илрүүлэх арга | Праймер-датчик илрүүлэх |
| ПГУ-ын арга | qPCR |
| Полимераз | Так ДНХ полимераз |
| Дээжийн төрөл | ДНХ |
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг хуурай мөстэй хамт тээвэрлэж, -25~-15℃ хэмд 2 жил хадгалах боломжтой.
Зааварчилгаа
1. УрвалСистем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн концентраци |
| 2× TaqMan мультиплекс qPCR мастер холимог | 12.5 | 1× |
| Праймер хольц (10 мкмоль/л) a | × | 0.1 - 0.5 мкмоль/л |
| Сорьцын хольц (10 мкмоль/л)b | × | 50 - 250 нмоль/л |
| Rox лавлагаа будаг | 0.5 | 1× |
| Загвар ДНХ/цДНХ | 1-10 | - |
| ddH2O | 25 хүртэл | - |
Тэмдэглэл:Хүчтэй сэгсрэхээс хэт их бөмбөлөг үүсэхээс сэргийлж хэрэглэхийн өмнө сайтар холино.
а.Праймерын концентраци: Праймер хольц нь ихэвчлэн 0.2 мкмоль/л-ийн эцсийн концентрацитай олон хос праймерыг агуулдаг ба шаардлагатай бол 0.1-0.5 мкмоль/л-ийн хооронд тохируулж болно.
б.Сорьцын концентраци: Пробын холимог нь янз бүрийн флюресценцийн дохио бүхий олон датчик агуулдаг бөгөөд датчик бүрийн концентрацийг тодорхой нөхцөл байдлаас хамааран 50-250 нмоль/л хооронд тохируулж болно.
1.Rox будгийн лавлагаа: Энэ нь худгийн хооронд үүссэн флюресценцийн дохионы алдааг засахын тулд Applied Biosystems гэх мэт бодит цагийн ПГУ-ын олшруулах хэрэгсэлд ашиглагддаг;Энэ бүтээгдэхүүнд Rox будгийн лавлагаа агуулаагүй болно.Шаардлагатай бол Cas # 10200 ашиглахыг зөвлөж байна.
2.Загварын шингэрүүлэлт: qPCR нь маш мэдрэмтгий бөгөөд хэрэглэхийн тулд загварыг шингэлэхийг зөвлөж байна.Хэрэв загвар нь cDNA-ийн нөөц уусмал бол загварын хэмжээ нь нийт эзлэхүүний 1/10-аас хэтрэхгүй байх ёстой.
3.Урвалын систем: Зорилтот генийг олшруулах үр дүнтэй, давтагдах чадварыг баталгаажуулахын тулд 25μL, 30μL эсвэл 50 μL хэрэглэхийг зөвлөж байна.
4.Системийн бэлтгэл: Хэт цэвэрхэн вандан сандал дээр бэлдэж, нуклеазын үлдэгдэлгүй зөвлөмж, урвалын хоолойг ашиглана уу;шүүлтүүрийн хайрцаг бүхий зөвлөмжийг ашиглахыг зөвлөж байна.Хөндлөн бохирдол, аэрозолийн бохирдлоос зайлсхийх.
2.Урвалын програм
| Циклийн алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Анхны денатураци | 95 ℃ | 5мин | 1 |
| Денатураци | 95 ℃ | 15 сек | 45 |
| Хагалах/өргөтгөх | 60 ℃ | 30 секунд |
Тэмдэглэл:
1.Хагалах/өргөтгөх: Температур ба цагийг загварчлагдсан праймер Tm утгын дагуу зохих ёсоор тохируулж болно.
2.Флюресценцийн дохио хүлээн авах: Янз бүрийн qPCR илрүүлэх хэрэгсэлд шаардагдах флюресценцийн дохиог хүлээн авах хугацаа өөр тул хамгийн бага хугацааны хязгаарын дагуу тохируулна уу.Хэд хэдэн нийтлэг хэрэгслийн цагийг дараах байдлаар тогтооно.
20 сек: Хэрэглээний Биосистем 7700, 7900HT, 7500 Хурдан
31 сек: Хэрэглээний Биосистем 7300
32 сек: Хэрэглээний Биосистем 7500
Тэмдэглэл
Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлыг хангах үүднээс лабораторийн цув, бээлий гэх мэт шаардлагатай ХХХ-ийг өмсөнө үү!
