BspQI
BspQI нь E. coli-д рекомбинант байдлаар илэрхийлэгдэх боломжтой бөгөөд энэ нь тодорхой сайтуудыг таних чадвартай бөгөөд дор үйлдвэрлэгддэг.
BspQI, IIs хязгаарлалтын эндонуклеазыг хязгаарлах эндонуклеаз нь Bacillus sphaericus-ийн клонжуулсан, өөрчлөгдсөн BspQI генийг агуулсан рекомбинант E. coli омогоос гаралтай.Энэ нь тодорхой сайтуудыг таних боломжтой бөгөөд таних дараалал болон хуваагдлын хэсгүүд нь дараах байдалтай байна.
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Бүтээгдэхүүний онцлог
1. Хөдөлгөөн ихтэй, Хоол боловсруулах чадвар хурдан;
2. Оддын идэвхжил бага, "хүсэх" шиг нарийн зүсэлт хийх;
3. BSA-гүй, амьтны гаралтай;
Метилжилтийн мэдрэмж
Dби метилизаци:Мэдрэмтгий биш;
Dсм метилжилт:Мэдрэмтгий биш;
CpG метилжилт:Мэдрэмтгий биш;
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг ≤ 0℃ тээвэрлэх ёстой;-25~-15℃ нөхцөлд хадгална.
Хадгалах буфер
20 мм Tris-HCl, 0.1 мм EDTA, 500 мм KCl, 1.0 мм дитиотреитол, 500 мкг/мл рекомбинант альбумин, 0. 1% Trition X- 100 ба 50% глицерин (рН 7.0 @2).
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь нийт 50 мкл урвалын эзэлхүүнтэй 50°С-т 1 мкг Дотоод хяналтын ДНХ-ийг 1 цагийн дотор задлахад шаардагдах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Чанарын шалгалт
Уургийн цэвэр байдлын шинжилгээ (SDS-PAGE):BspQI-ийн цэвэршилтийг SDS-PAGE шинжилгээгээр ≥95% тодорхойлсон.
RNase:1.6μg MS2 РНХ-тай 10U BspQI-ийг 50℃ температурт 4 цагийн турш хэрэглэхэд агароз гель электрофорезээр тодорхойлогдоход ямар ч задрал гарахгүй.
Өвөрмөц бус DNase үйл ажиллагаа:10U BspQI-ийн 1μg λ ДНХ-тай 50℃-т 16 цагийн турш, 1 цагийн турш 50℃-тай харьцуулахад агароз гель электрофорезоор тодорхойлогдсон ДНХ илүүдэл үүсэхгүй.
Холбох ба дахин зүсэх:1 мкг λДНХ-г 10U BspQI-тэй задаргаа хийсний дараа ДНХ-ийн хэсгүүдийг 16ºC-т T4 ДНХ лигазтай холбож болно.Мөн эдгээр холбосон хэсгүүдийг BspQI ашиглан дахин зүсэж болно.
E. coli ДНХ: E. coli 16s rDNA-ийн өвөрмөц TaqMan qPCR илрүүлэх нь E.coli геномын үлдэгдэл ≤ 0.1pg/ul болохыг харуулсан.
Хост уургийн үлдэгдэл:≤ 50 ppm
Бактерийн Эндотоксин: LAL-тест, Хятадын фармакопейн IV 2020 оны хэвлэлд заасны дагуу гель хязгаарлах туршилтын арга, ерөнхий дүрэм (1143).Бактерийн эндотоксины агууламж ≤10 ЕС/мг байх ёстой.
Урвалын систем ба нөхцөл
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| BspQ I (10 U/μл) | 1 мкл |
| ДНХ | 1 мкг |
| 10 x BspQ I буфер | 5 мкл |
| dd H2O | 50 мкл хүртэл |
Урвалын нөхцөл: 50 ℃, 1~16 цаг.
Дулаан идэвхгүй болгох: 80 ° C-д 20 минутын турш.
Санал болгож буй урвалын систем ба нөхцөлүүд нь ферментийн задралын харьцангуй сайн үр нөлөөг өгөх боломжтой бөгөөд энэ нь зөвхөн лавлагаа юм, дэлгэрэнгүйг туршилтын үр дүнгээс үзнэ үү.
Бүтээгдэхүүний хэрэглээ
Эндонуклеазын боловсруулалтыг хязгаарлах, Хурдан клончлох.
Тэмдэглэл
1. Ферментийн эзэлхүүн урвалын эзэлхүүний ≤ 1/10.
2. Глицерины концентраци 5%-иас дээш байвал одны идэвхжил үүсч болно.
3. Субстрат санал болгосон харьцаанаас доогуур байвал задралын идэвхжил үүсч болно.
