Bst 2.0 ДНХ Полимераз (Глицеролгүй)
Bst ДНХ полимераза V2 нь Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I-ээс гаралтай бөгөөд 5′→3′ ДНХ полимераза идэвхжилтэй, гинжийг орлуулах хүчтэй боловч 5′→3′ экзонуклеазын идэвхжилгүй.Bst DNA Polymerase V2 нь хэлхээний шилжилт, изотерм өсгөлтийн LAMP (Loop mediated isothermal amplification) болон хурдан дараалалд нэн тохиромжтой.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(Глицеролгүй)(8U/μL) | 0.2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфер | 1.5 мл | 2 × 1.5 мл | 3х10 мл |
| MgSO4(100 мм) | 1.5 мл | 2 × 1.5 мл | 2 × 10 мл |
Хэрэглээ
1.LAMP изотермийн олшруулалт
2.ДНХ-ийн хэлхээний нэг шилжилтийн урвал
3. Өндөр GC генийн дараалал
4.Нанограмм түвшний ДНХ-ийн дараалал.
Хадгалах нөхцөл
0°С-аас доош температурт тээвэрлэж, -25°C~-15°C хэмд хадгална.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь 65°С-т 30 минутын дотор 25 нмоль dNTP-ийг хүчилд уусдаггүй материалд оруулах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Чанарын шалгалт
1.Уургийн цэвэр байдлын шинжилгээ (SDS-PAGE):Bst ДНХ полимераза V2-ийн цэвэршилтийг Coomassie Blue илрүүлэлтийг ашиглан SDS-PAGE шинжилгээгээр ≥99% тодорхойлно.
2.Экзонуклеазын үйл ажиллагаа:Доод тал нь 8 U Bst ДНХ полимераз V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1 мкг λ -Ард Ⅲ задралын ДНХ-ийг 37 ℃ температурт 16 цагийн турш инкубацлахад тодорхойлсноор илрэхуйц доройтол гарахгүй.
3.Никазын үйл ажиллагаа:Хамгийн багадаа 8 U Bst ДНХ полимераза V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1 мкг pBR322 ДНХ-тэй 37°С-т 16 цагийн турш инкубацлахад тодорхойлогдсон шиг задрал илрэхгүй.
4.RNase үйл ажиллагаа:Хамгийн багадаа 8 U Bst ДНХ полимераза V2 агуулсан 50 мкл-ийн урвалыг 1.6 мкг MS2 РНХ-тай 37°С-т 16 цагийн турш инкубацлахад илэрсэн задрал байхгүй болно.
5.E. coli ДНХ:120 U Bst ДНХ полимераза V2-ийг E. coli геномын ДНХ байгаа эсэхийг E. coli 16S rRNA локусын өвөрмөц праймер бүхий TaqMan qPCR ашиглан шалгана.E. coli геномын ДНХ-ийн бохирдол ≤1 хуулбар байна.
LAMP урвал
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | 25мкЛ |
| 10×HC Bst V2 буфер | 2.5 мкл |
| MgSO4 (100 мм) | 1.5 мкл |
| dNTPs (тус бүр 10мМ) | 3.5 мкл |
| SYTO™ 16 Ногоон (25×)a | 1.0 мкл |
| Праймер хольцb | 6 мкл |
| Bst ДНХ Полимераз V2 (Глицеролгүй) (8 U/uL) | 1 мкл |
| Загвар | × μл |
| ddH₂O | 25 мкл хүртэл |
Тэмдэглэл:
1) а.SYTOTM 16 Ногоон (25×): Туршилтын хэрэгцээний дагуу бусад будагч бодисыг орлуулагч болгон ашиглаж болно;
2) б.Праймерын хольц: 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μ M F3, 2.5 μ M B3, 5 μ M LF, 5 μ M LB болон бусад хэмжээсийг холих замаар олж авна.
Урвал ба нөхцөл байдал
1 × HC Bst V2 буфер, инкубацийн температур 60 ° C-аас 65 ° C хооронд байна.
Дулаан идэвхгүйжүүлэх
80 ° C, 20 минут
