CHO HCP ELISA иж бүрдэл
Энэ шинжилгээнд нэг үе шаттай иммуносорбентын ELISA аргыг ашигладаг.CHOK1 HCP агуулсан дээж нь HRP шошготой ямааны эсрэг CHOK1 эсрэгбие болон ELISA хавтан дээр бүрхэгдсэн CHOK1 эсрэгбиетэй нэгэн зэрэг урвалд орж, эцэст нь хатуу фазын эсрэгбие-HCP шошготой эсрэгбиеийн сэндвич цогцолборыг үүсгэдэг.Холбоогүй эсрэгтөрөгч-эсрэгбиемийг ELISA хавтанг угаах замаар устгаж болно.TMB субстратыг хангалттай хариу үйлдэл үзүүлэхийн тулд худагт нэмнэ.Зогсоох уусмалыг нэмсний дараа өнгө үүсэхийг зогсоож, 450/650 нм-ийн урвалын уусмалын OD буюу шингээлтийн утгыг микропластин уншигчаар уншина.OD утга буюу шингээлтийн утга нь уусмал дахь HCP-ийн агууламжтай пропорциональ байна.Эндээс уусмал дахь HCP-ийн концентрацийг стандарт муруй дагуу тооцоолж болно.
Өргөдөл
Энэхүү иж бүрдэл нь дээж дэх CHOK1 эсийн уургийн үлдэгдлийг тоон байдлаар илрүүлэхэд хэрэглэгддэг.
Cөрсөлдөгчид
| S/N | Бүрэлдэхүүн хэсэг | Төвлөрөл | Хадгалах нөхцөл |
| 1 | CHOK1 HCP стандарт | 0.5 мг/мл | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5 мг/мл | ≤–20℃, гэрлээс хамгаална |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, гэрлээс хамгаална |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Шийдлийг зогсоо | NA | RT |
| 6 | Бичил хавтангийн чигжээс | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Өндөр шингээх чадвартай урьдчилан бүрэх хавтан | NA | 2-8℃ |
Шаардлагатай тоног төхөөрөмж
| Хэрэглээний материал / Тоног төхөөрөмж | Үйлдвэрлэх | Каталог |
| Микроплит уншигч | Молекулын төхөөрөмж | Spectra Max M5, M5e, эсвэл түүнтэй адилтгах |
| Термомикс | Эпендорф | Eppendorf/5355, эсвэл түүнтэй адилтгах |
| Vortex холигч | IKA | MS3 Дижитал, эсвэл түүнтэй адилтгах |
Хадгалалт ба тогтвортой байдал
1.-25~-15°С температурт тээвэрлэнэ.
2.Хадгалах нөхцөлийг 1-р хүснэгтэд үзүүлэв;1-2-р бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ≤–20°C хэмд, 5-6-г RT,3-т хадгална.4、7、8 нь 2-8℃ хэмд хадгалагдана;хүчинтэй байх хугацаа 12 сар.
Бүтээгдэхүүний параметрүүд
1.Мэдрэмж: 1нг/мл
2.Илрүүлэх хүрээ: 3- 100нг/мл
3.Нарийвчлал: Шинжилгээний доторх CV≤ 10%, шинжилгээ хоорондын CV≤ 15%
4.HCP хамрах хүрээ: >80%
5.Өвөрмөц чанар: Энэхүү иж бүрдэл нь цэвэршүүлэх процессоос үл хамааран CHOK1 HCP-тэй тусгайлан урвалд ордог тул бүх нийтийнх юм.
Урвалж бэлтгэх
1.PBST 0.05%
15 мл 20×PBST 0.05%, ddH-ээр шингэлнэ2O, мөн 300 мл хүртэл хийсэн.
2.1.0% BSA
Савнаас 1г BSA авч 100 мл PBST 0.05%-д шингэлж бүрэн уустал сайтар хольж, 2-80С-т хадгална.Бэлтгэсэн шингэрүүлэх буфер нь 7 хоногийн турш хүчинтэй.Шаардлагатай бол бэлтгэхийг зөвлөж байна.
3.Илрүүлэх уусмал 2мкг/мл
0.5 мг/мл Анти-CHO HCP-HRP-аас 48μL авч, 11,952μL 1% BSA-д шингэлж, 2μг/мл илрүүлэх уусмалын эцсийн концентрацийг авна.
4.Чанарын хяналт ба CHOK1 HCP стандартыг бэлтгэх
| Хоолой Үгүй | Жинхэнэ | Төвлөрөл | Эзлэхүүн | 1% BSA | нийт эзлэхүүн | Финал |
| A | Стандарт | 0.5 мг/мл | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Хүснэгт: Чанарын хяналт, стандартын бэлтгэл
Шинжилгээний журам
1.Дээрх "Урвагч бэлтгэх" хэсэгт заасны дагуу урвалжуудыг бэлтгэ.
2.Худаг тус бүрт 50 мкл стандарт, дээж, чанарын хяналт (Хүснэгт 3-ыг үзнэ үү) авч, дараа нь 100 мкл Илрүүлэх уусмал (2 мкг/мл) нэмнэ;Хавтанг битүүмжлэгчээр хучиж, ELISA хавтанг термомикс дээр байрлуулна.500 rpm, 25±3℃-т 2 цагийн турш өсгөвөрлөнө.
3.Угаалтуур дахь бичил хавтанг эргүүлж, бүрэх уусмалыг хаяна.300мкл PBST 0.05% пипеткээр цооногоор ELISA хавтанг угааж уусмалыг хаяад 3 удаа угаана.Цэвэр цаасан алчуур дээр тавгийг эргүүлээд хатаана.
4.Худаг тус бүрт 100μL TMB субстрат (Хүснэгт 1-ийг үзнэ үү) нэмж, ELISA хавтанг битүүмжилж, харанхуй газар 25±3℃ температурт 15 минутын турш өсгөвөрлөнө.
5.Цооног болгонд 100 мкл зогсоох уусмалыг пипеткээр хийнэ.
6.Микропластин уншигч ашиглан 450/650нм долгионы уртад шингээх чадварыг хэмжинэ.
7.SoftMax эсвэл түүнтэй адилтгах программ хангамжаар өгөгдөлд дүн шинжилгээ хийх.Дөрвөн параметрийн логистик регрессийн загварыг ашиглан стандарт муруйг зур.
Стандарт муруй жишээ
ТАЙЛБАР: Хэрэв дээж дэх HCP-ийн концентраци нь стандарт муруйн дээд хязгаараас хэтэрсэн бол туршилт хийхээс өмнө шингэлэх буферээр зохих ёсоор шингэлэх шаардлагатай.
ТАЙЛБАР
Зогсоох уусмал нь 2М хүхрийн хүчил тул ус цацахаас сэргийлж болгоомжтой харьцана уу!
