Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Цэнхэр)
Муур дугаар: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) нь өндөр мэдрэмж, өвөрмөц чанараараа тодорхойлогддог, 2 × бодит цагийн тоон ПГУ-ын олшруулалтад зориулсан урьдчилсан уусмал бөгөөд цэнхэр өнгөтэй, дээж нэмэх нөлөөтэй.Үндсэн бүрэлдэхүүн хэсэг Taq ДНХ полимераза нь дээж бэлтгэх явцад праймерын задралын улмаас өвөрмөц бус олшролтыг дарангуйлахын тулд эсрэгбие халуун эхлэлийг ашигладаг.Үүний зэрэгцээ, томьёо нь ПГУ-ын урвалын олшруулалтын үр ашгийг дээшлүүлэх, өөр өөр GC агууламжтай (30 ~ 70%) генийн олшролтыг тэнцүүлэх түлхэц өгөх хүчин зүйлсийг нэмдэг бөгөөд ингэснээр тоон ПГУ нь өргөн тоон үзүүлэлтэд сайн шугаман хамаарлыг олж авах боломжтой болно. бүс нутаг.Энэ бүтээгдэхүүн нь ихэнх qPCR хэрэгсэлд хамаарах тусгай ROX идэвхгүй лавлагаа будаг агуулсан.Янз бүрийн багаж дээр ROX-ийн концентрацийг тохируулах шаардлагагүй.Урвалын системийг олшруулахад бэлтгэхийн тулд зөвхөн праймер болон загваруудыг нэмэх шаардлагатай.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
Universal Blue qPCR Master Mix
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг мөстэй савласан бөгөөд -25℃~-15℃ хэмд 18 сар хадгалах боломжтой.Урвалын системийг хадгалах, бэлтгэх үед хүчтэй гэрлийн цацрагаас зайлсхийх шаардлагатай.
Тодорхойлолт
| Төвлөрөл | 2× |
| Илрүүлэх арга | SYBR |
| ПГУ-ын арга | qPCR |
| Полимераз | Так ДНХ полимераз |
| Дээжийн төрөл | ДНХ |
| Хэрэглээний төхөөрөмж | Ихэнх qPCR хэрэгслүүд |
| Бүтээгдэхүүний төрөл | Бодит цагийн флюресценцийн тоон ПГУ-ын SYBR премикс |
| Өргөдөл гаргах (програм) | Генийн илэрхийлэл |
Зааварчилгаа
1. Урвалын систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн(μL） | Эзлэхүүн(μL） | Эцсийн концентраци |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Урагшаа праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0.2 мкмоль/л |
| Урвуу праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0.2 мкмоль/л |
| ДНХ | X | X | |
| ddH2O | 50 хүртэл | 20 хүртэл | - |
[Тэмдэглэл]: Хүчтэй сэгсрэхээс хэт их бөмбөлөг үүсэхээс сэргийлж хэрэглэхийн өмнө сайтар холино.
a) Праймерын концентраци: Эцсийн праймерын концентраци нь 0.2μмоль/л бөгөөд мөн шаардлагатай бол 0.1-1.0μмоль/л хооронд тохируулж болно.
b) Загварын концентраци: Хэрэв загвар нь шингэлээгүй cDNA нөөцийн уусмал байвал ашигласан хэмжээ нь qPCR урвалын нийт эзэлхүүний 1/10-аас хэтрэхгүй байх ёстой.
c) Загварын шингэрүүлэлт: cDNA нөөцийн уусмалыг 5-10 дахин шингэлэхийг зөвлөж байна.Олшруулах замаар олж авсан Ct утга нь 20-30 цикл байх үед нэмсэн загварын оновчтой хэмжээ нь илүү дээр юм.
d) Урвалын систем: Зорилтот генийг олшруулах үр дүнтэй, давтагдах чадварыг баталгаажуулахын тулд 20μL эсвэл 50μL хэрэглэхийг зөвлөж байна.
e) Системийн бэлтгэл: Хэт цэвэрхэн вандан сандал дээр бэлдэж, нуклеазын үлдэгдэлгүй зөвлөмж, урвалын хоолойг ашиглана уу;шүүлтүүрийн хайрцаг бүхий зөвлөмжийг ашиглахыг зөвлөж байна.Хөндлөн бохирдол, аэрозолийн бохирдлоос зайлсхийх.
2.Урвалын програм
Стандарт програм
| Циклийн алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Анхны денатураци | 95℃ | 2 мин | 1 |
| Денатураци | 95℃ | 10 сек | 40 |
| Хагалах/өргөтгөх | 60℃ | 30 сек★ | |
| Хайлах муруйн үе шат | Хэрэгслийн өгөгдмөл | 1 | |
Түргэн програм
| Циклийн алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Анхны денатураци | 95℃ | 30 сек | 1 |
| Денатураци | 95℃ | 3 сек | 40 |
| Хагалах/өргөтгөх | 60℃ | 20 сек★ | |
| Хайлах муруйн үе шат | Хэрэгслийн өгөгдмөл | 1 | |
[Тэмдэглэл]: Хурдан програм нь генийн дийлэнх хэсэгт тохиромжтой бөгөөд стандарт программуудыг бие даасан нарийн төвөгтэй хоёрдогч бүтцийн генүүдэд туршиж үзэх боломжтой.
a) Хатаах температур ба хугацаа: Праймер болон зорилтот генийн уртаас хамааран тохируулна уу.
b) Флюресценцийн дохиог авах (★): Туршилтын горимыг багажийг ашиглах зааварт заасан шаардлагын дагуу тохируулна уу.
c) Хайлах муруй: Багажны анхдагч програмыг ердийн байдлаар ашиглаж болно.
3. Үр дүнгийн шинжилгээ
Тоон туршилт хийхэд хамгийн багадаа гурван биологийн хуулбар шаардлагатай байсан.Урвалын дараа олшруулалтын муруй болон хайлах муруйг баталгаажуулах шаардлагатай.
3.1 Олшруулалтын муруй:
Стандарт олшруулалтын муруй нь S хэлбэртэй байна.Тоон шинжилгээ нь Ct-ийн утга 20-30-ын хооронд байвал хамгийн үнэн зөв байдаг. Хэрэв Ct-ийн утга 10-аас бага бол загварыг шингэлж дахин туршилт хийх шаардлагатай.Ct-ийн утга 30-35 хооронд байвал олшруулах үр ашгийг дээшлүүлж, үр дүнгийн шинжилгээний нарийвчлалыг хангахын тулд загварын концентраци эсвэл урвалын системийн эзэлхүүнийг нэмэгдүүлэх шаардлагатай.Ct-ийн утга 35-аас их байвал шинжилгээний үр дүн нь генийн илэрхийлэлд тоон дүн шинжилгээ хийх боломжгүй боловч чанарын шинжилгээнд ашиглаж болно.
3.2 Хайлах муруй:
Хайлах муруйн нэг оргил нь урвалын өвөрмөц чанар сайн, тоон шинжилгээ хийх боломжтойг харуулж байна;хайлах муруй нь давхар эсвэл олон оргилыг харуулсан бол тоон шинжилгээ хийх боломжгүй.Хайлах муруй нь давхар оргилуудыг харуулж байгаа бөгөөд зорилтот бус оргил нь праймер димер эсвэл ДНХ-ийн агароз гель электрофорезийн өвөрмөц бус олшруулалт уу гэдгийг шүүх шаардлагатай.Хэрэв энэ нь праймер димер бол праймерын концентрацийг багасгах эсвэл олшруулалтын өндөр үр ашигтай праймерыг дахин төлөвлөхийг зөвлөж байна.Хэрэв энэ нь өвөрмөц бус олшруулалт бол анивчих температурыг нэмэгдүүлэх эсвэл праймеруудыг өвөрмөц байдлаар дахин төлөвлөнө үү.
Тэмдэглэл
Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлыг хангах үүднээс лабораторийн цув, бээлий зэрэг шаардлагатай ХХХ-ийг өмсөнө үү!
Энэхүү бүтээгдэхүүн нь ЗӨВХӨН судалгаанд зориулагдсан!
