Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Муур дугаар: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) нь загвар болгон РНХ дээр суурилсан мультиплекс тоон ПГУ-ын хэрэгсэл юм.Туршилтын явцад урвуу транскрипц болон тоон ПГУ-ыг нэг хоолойд хийсэн нь туршилтын ажиллагааг хялбарчилж, бохирдох эрсдэлийг бууруулсан.Энэхүү иж бүрдэлд эхний хэлхээний cDNA-г халуунд тэсвэртэй урвуу транскриптазагаар үр дүнтэй нийлэгжүүлж, HotStart Tag ДНХ Полимеразагаар тоон хэмжээгээр олшруулсан.Иж бүрдэл нь голчлон оновчтой МП буфер, ферментийн холимог гэх мэтийг агуулдаг. Буферийн уусмалд аль хэдийн Mg агуулагддаг.2+болон dNTP.Нэмж дурдахад, ПГУ-ын өвөрмөц бус олшролтыг үр дүнтэй дарангуйлж, олон qPCR урвалын олшруулалтын үр ашгийг дээшлүүлэх хүчин зүйлсийг нэмсэн бөгөөд энэ нь олшруулагчийн үр ашгийг баталгаажуулж, олон олшруулах урвал явуулах боломжтой.Аэрозольоор бохирдох эрсдэлээс үр дүнтэй урьдчилан сэргийлэхийн тулд dUTP/UDG системийг нэмсэн.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
1. Буфер
2. Ферментийн холимог
Тодорхойлолт
| Халуун эхлэл | Баригдсан халуун эхлэл |
| Илрүүлэх арга | Праймер-датчик илрүүлэх |
| ПГУ-ын арга | Нэг алхам RT-qPCR |
| Полимераз | Так ДНХ полимераз |
| Дээжийн төрөл | ДНХ |
Хадгалах нөхцөл
Бүтээгдэхүүнийг хуурай мөстэй хамт тээвэрлэж -25~-15℃ хэмд 1 жил хадгалах боломжтой.Энэ нь байнга зайлсхийх ёстойхөлдөөх гэсгээх.Тус тусад нь хадгалахыг зөвлөж байна.
Зааварчилгаа
1.Урвал Систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн концентраци |
| 2 × MP буфер | 12.5 | 1× |
| Ферментийн холимог | 1 | - |
| Праймер/зондны хольц (2.5 мкм) | 3 | 0.3μM |
| Загвар РНХ | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | 25 хүртэл | - |
Тэмдэглэл:
Хэрэглэхийн өмнө сайтар хольж, хүчтэй чичиргээнээс үүдэлтэй хэт их бөмбөлөг үүсэхээс зайлсхийх хэрэгтэй.
а.Праймерын концентраци: Нөхцөл байдлаас хамааран праймерын хамгийн оновчтой концентраци 0.l-ээс 1.0μM хооронд байж болохуйц мультиплекс праймерыг багтаасан праймер хольц.
б.Сорьцын концентраци: Нөхцөл байдлаас хамааран датчикийн оновчтой концентраци 0.05-0.5μМ байж болохуйц флюресцент бүлгийн флюресцент бүлгийн флюресцентийн тэмдэглэгээг агуулсан датчик хольц.
в.Загварын шингэрүүлэлт: qPCR нь маш мэдрэмтгий тул загварыг шингэлэхийг зөвлөж байна.Хяналтын Ct утга нь 20-35 хооронд тохиромжтой.
г.Системийн бэлтгэл: Хэт цэвэр ажлын ширээ, пипеткич, урвалын хоолойг нуклеазын үлдэгдэлгүйгээр бэлтгэнэ үү;шүүлтүүр элемент бүхий бууны толгойг ашиглахыг зөвлөж байна.Хөндлөн бохирдол, аэрозолийн бохирдлоос зайлсхийх.
2. Оновчтой дугуй унахПротокол
| Цикл алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Урвуу хуулбар | 50℃а | 20мин | 1 |
| Анхны денатураци | 95℃ | 5мин | 1 |
| Олшруулах урвал | 95℃ | 15 сек |
40-45 |
| 60℃ b | 30 секунд c |
Тэмдэглэл:
а.Урвуу хуулбар: Температур нь 42 ° C эсвэл 50 ° C-ийг сонгох боломжтой.
б.Олшруулах урвал: Температурыг зохион бүтээсэн праймеруудын Tm утгын дагуу тохируулна.
в.Флюресценцийн дохиог авах: Туршилтын журмыг багажийн гарын авлагын шаардлагын дагуу тохируулна уу.
Тэмдэглэл
Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлыг хангах үүднээс лабораторийн цув, бээлий зэрэг шаардлагатай хувийн хамгаалалтын хэрэгслийг өмсөнө үү.
