Нэг алхам RT-qPCR SYBR Green Premix
Муур дугаар: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix нь SYBR Green I будаг дээр суурилсан флюресценцийн хэмжилтэд зориулагдсан.Генийн өвөрмөц праймерыг ашиглан урвуу транскрипц болон qPCR урвалыг нэг хуруу шилэнд хийж гүйцэтгэснээр таглааг дахин дахин нээх, пиптинг хийх шаардлагагүй болж, шинжилгээний үр ашгийг эрс сайжруулж, бохирдох эрсдэлийг бууруулдаг.РНХ дээжийн хувьд иж бүрдэл нь үр дүнтэй cDNA синтез хийхэд халуунд тэсвэртэй урвуу транскриптаза, тоон олшруулалтад зориулж HotStart Taq ДНХ полимераза ашигладаг.Оновчтой буферийн системийн дагуу иж бүрдэлийн мэдрэмж өндөр илэрхийлэгдсэн зорилтот хувьд 0.1 pg, дунд зэргийн илэрхийлэлд 1 pg хүртэл өндөр байж болно.Энэхүү иж бүрдэл нь ДНХ-ийн дээжийг олшруулах, хэмжихэд тохиромжтой.Энэ нь янз бүрийн ургамал, амьтны дээж, эс, бичил биетний нуклейн хүчлийг нарийн илрүүлэх, тоо хэмжээг тогтоох боломжийг олгодог.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| No | Нэр | Эзлэхүүн | Эзлэхүүн |
| 1 | Нарийвчилсан буфер | 250 мкл | 2×1.25 мл |
| 2 | Нарийвчилсан ферментийн холимог | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | RNase Free H2O | 250 мкл | 2×1.25 мл |
Хадгалах нөхцөл
Энэ бүтээгдэхүүнийг гэрлээс хол, -25~-15℃ хэмд 1 жил хадгална.
Зааварчилгаа
1.Reaction системийн тохиргооd
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн төвлөрөл |
| Нарийвчилсан буфер | 12.5 | 25 | 1× |
| Нарийвчилсан ферментийн холимог | 1 | 2 | - |
| Урагш праймер (10 мкмоль/л)a | 0.5 | 1 | 0.2 мкмоль/л |
| Урвуу праймер (10 мкмоль/л)a | 0.5 | 1 | 0.2 мкмоль/л |
| РНХ Тамплатb | X | X | - |
| RNase Free H2Оc | 25 хүртэл | 50 хүртэл | - |
Тэмдэглэл:
1) а.ТПраймерын эцсийн концентраци нь 0.2 мкмоль/л байсан бөгөөд үүнийг 0.1-1 мкмоль/л-ийн хооронд тохируулж болно.
2) б.Урвалж нь маш мэдрэмтгий бөгөөд Нийт РНХ 1pg-1μg-ийн мужид байдаг ба хүний дээжийг турших нь оновчтой оролтыг 1 pg-100 нг харуулж, нийт Ct утгыг 15-30 хооронд хянадаг.
3) в.Зорилтот генийн олшруулалтын хүчин төгөлдөр байдал, дахин үржих чадварыг баталгаажуулахын тулд 20μL эсвэл 50μL ашиглахыг зөвлөж байна.
4) г.Хэт цэвэрхэн вандан сандал дээр бэлдэж, нуклеазын үлдэгдэлгүй зөвлөмж, урвалын хоолой ашиглана уу;шүүлтүүрийн хайрцаг бүхий зөвлөмжийг санал болгож байна.Хөндлөн бохирдол, аэрозолийн бохирдлоос зайлсхийх.
2.Урвалын програм
| Циклийн алхам | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Урвуу хуулбар | 50℃a | 6мин | 1 |
| Анхны денатураци | 95℃ | 5мин | 1 |
| Олшруулах урвал | 95℃ | 15 сек | 40 |
| 60℃b | 30 сек | ||
| Хайлах муруйн үе шат | Хэрэгслийн өгөгдмөл | 1 | |
Тэмдэглэл:
1) а.Урвуу транскрипцийн температурыг туршилтын хэрэгцээний дагуу 50-55 ° C-ийн хооронд сонгож болно.ДНХ дээжийн хувьд урвуу транскрипцийн процессыг орхигдуулж болно.
2) б.Онцгой тохиолдлуудад зөөлрүүлэх/өргөтгөх температурыг праймерын Tm утгын дагуу тохируулж болно, 60°C-ийг санал болгож байна.
Тэмдэглэл
1. Энэхүү бүтээгдэхүүн нь зөвхөн судалгааны зориулалттай.
2. Аюулгүй байдлын үүднээс лабораторийн цув, нэг удаагийн бээлийтэй ажиллана уу.
