Rnase дарангуйлагч (глицерингүй)
Хулганы RNase дарангуйлагч нь E.coli-ээс ялгаруулж, цэвэршүүлсэн рекомбинант хулганы RNase дарангуйлагч юм.Энэ нь ковалент бус холбоогоор 1:1 харьцаатай RNase A, B эсвэл C-тэй холбогддог бөгөөд ингэснээр гурван ферментийн идэвхийг саатуулж, РНХ-ийг задралаас хамгаалдаг.Гэсэн хэдий ч энэ нь RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H эсвэл Aspergillus-ийн RNase-ийн эсрэг үр дүнтэй биш юм.Хулганы RNase дарангуйлагчийг RT-PCR, RT-qPCR болон IVT мРНХ-ээр туршсан бөгөөд төрөл бүрийн арилжааны урвуу транскриптаза, ДНХ полимераза, РНХ полимеразуудтай нийцэж байсан.
Хүний RNase дарангуйлагчтай харьцуулахад хулганы RNase дарангуйлагч нь исэлдэлтэнд маш мэдрэмтгий хоёр цистеин агуулаагүй бөгөөд энэ нь дарангуйлагчийг идэвхгүй болгоход хүргэдэг.Энэ нь DTT-ийн бага концентрацид (1 мм-ээс бага) тогтвортой байдаг.Энэ онцлог нь DTT-ийн өндөр концентраци нь урвалд сөрөг нөлөө үзүүлэх урвалд хэрэглэхэд тохиромжтой (жишээ нь, бодит цагийн RT-PCR).
Aхэрэглээ
Энэхүү бүтээгдэхүүнийг РНХ-ийн задралаас зайлсхийхийн тулд RNase хөндлөнгийн оролцоотой аливаа туршилтанд өргөнөөр ашиглаж болно, тухайлбал:
1.Эхний хэлхээний cDNA синтез, RT-PCR, RT-qPCR гэх мэт;
2. РНХ-ийг in vitro транскрипци/орчуулгад задралаас хамгаалах (жишээ нь, in vitro вирусын хуулбар);
3.РНХ-ийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх явцад RNase-ийн үйл ажиллагааг дарангуйлах.
Хадгалах нөхцөл
-25～-15℃ хэмд хадгална;
Хөлдөөх гэсэлтийн мөчлөг ≤ 5 удаа;
1 жилийн хугацаанд хүчинтэй.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгжийг 5 нг RNase A-ийн идэвхийг 50%-иар дарангуйлахад шаардагдах RNase дарангуйлагчийн хэмжээг тодорхойлно.
Молекулын жин
RNase дарангуйлагч (Глицеролгүй) нь 50 кДа уураг юм.
Чанарын шалгалт
Экзонуклеаз Үйл ажиллагаа:
40 U ферментийг 1 мкг λ-Hind III задралын ДНХ-тэй 37°С-т 16 цагийн турш инкубацлахад гель электрофорезоор тодорхойлогдсон ДНХ-ийн задрал илрээгүй.
Эндонуклеазын үйл ажиллагаа:
40 U ферментийг 1 мкг λ ДНХ-тэй 370С-т 16 цагийн турш инкубацлахад гель электрофорезоор тодорхойлогдсон ДНХ-ийн задрал илрээгүй.
Никлэх Үйл ажиллагаа:
40 U ферментийг 1 мкг pBR322-тэй 37 хэмд 16 цагийн турш инкубацлахад гель электрофорезоор тодорхойлсон ДНХ-ийн задрал илрээгүй.
RNase Үйл ажиллагаа:
40 U ферментийг 1.6 мкг MS2 РНХ-тай 37 хэмд 4 цагийн турш инкубацлахад гель электрофорезоор тодорхойлсон РНХ-ийн задрал илрээгүй.
E.коли ДНХ:
40 U ферментийг TaqMan qPCR-ээр илрүүлдэг.E.coli ДНХ нь ≤ 0. 1pg/40U байна.
Notes
1. Ферментийг идэвхгүйжүүлэхээс сэргийлэхийн тулд сэгсэрч, хүчтэй хутгаж болохгүй.
2.RNase дарангуйлагч нь 25℃-аас 55℃ хүртэлх температурт идэвхтэй бөгөөд ≥65℃-д идэвхгүй болдог.
3. RNase H, RNase 1, RNase T1-ийн идэвхжил саатдаггүй.
4. RNase идэвхийг дарангуйлах рН-ийн хүрээ өргөн (рН 5-9-д идэвхтэй), рН 7-8-д хамгийн их идэвхжилтэй байдаг.
