Температурын мэдрэмжтэй UNG
Температурын мэдрэмжтэй UNG (TS-UNG) нь гэдэсний савханцар дахь рекомбинант илэрхийлэл юм.Фермент нь урацил агуулсан нэг ба хоёр судалтай ДНХ-ээс чөлөөт урацилыг ялгаруулж, РНХ-ийн эсрэг идэвхгүй байдаг.E. coli генийн гаралтай уламжлалт UNG ферменттэй харьцуулахад TS-UNG фермент нь бага температурт (20℃~37℃) илүү өндөр идэвхжилтэй бөгөөд температурт мэдрэмтгий, амархан идэвхгүй болдог (50℃) бөгөөд dUTP агуулсан олшруулалтын задралаас зайлсхийдэг. Уламжлалт UNG ферментийг идэвхгүй болгосны дараа үлдэж болзошгүй үлдэгдэл үйлчлэлээр тасалгааны температурт бүтээгдэхүүн.Тиймээс TS-UNG фермент нь ПГУ-ын бохирдлоос урьдчилан сэргийлэх урвалд тохиромжтой төдийгүй RT-ПГУ-ын олшруулах хөтөлбөртэй сайн таарч, RT-ПГУ-ын бохирдлоос урьдчилан сэргийлэх урвалд ашиглаж болно.
Санал болгож буй програм
Бохирдлоос урьдчилан сэргийлэх олшруулалт
Хадгалах нөхцөл
-20°С-д удаан хугацаагаар хадгалах, хэрэглэхийн өмнө сайтар хольж, хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхийх хэрэгтэй.
Хадгалах буфер
20 мм Tris-HCl (рН 7.5), 100 мм NaCl, 0.1 мм EDTA, 1 мм DTT, тогтворжуулагч, 50% глицерин.
Нэгжийн тодорхойлолт
dU суурь агуулсан 1 мкг нэг судалтай ДНХ-ийг 37°С-т 1 цагийн дотор задлахад шаардагдах ферментийн хэмжээ нь 1 нэгж үйл ажиллагаа (U) байна.
Чанарын шалгалт
1.SDS-PAGE электрофоретик цэвэршилт 98%-иас дээш
2.Эвдрэлийн үйл ажиллагаа, багцын хяналт, тогтвортой байдал
3.Экзоген нуклеазын идэвхжил байхгүй, экзоген эндонуклеаз эсвэл экзонуклеазын бохирдол байхгүй.
Зааварчилгаа
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн төвлөрөл |
| 10 × ПГУ-ын буфер (dNTP агуулаагүй, Mg²+үнэгүй) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкм |
| dUTP (dTTP солих) | - | 200-600 мкМ |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мм |
| 5 U/μL Так | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Праймер хольца | 2 | 1× |
| Загвар | - | ＜1мкг / урвал |
| ddH₂O | 50 хүртэл | - |
Тайлбар: a: Хэрэв qPCR/qRT-PCR-д ашигласан бол флюресцент мэдрэгчийг урвалын системд нэмж оруулах шаардлагатай.Ихэвчлэн праймерын эцсийн концентраци 0.2 μM нь сайн үр дүнг өгдөг;урвалын гүйцэтгэл муу үед праймерын концентрацийг 0.2-1 μM-ийн хүрээнд тохируулж болно.Ихэвчлэн датчикийн концентрацийг 0.1-0.3 μM-ийн хүрээнд оновчтой болгодог.Праймер болон датчикийн хамгийн сайн хослолыг олохын тулд концентрацийн градиент туршилтыг хийж болно.
Тэмдэглэл
1.TS-UNG ферментийн урвалын оновчтой температур харьцангуй бага бөгөөд 20℃~37℃, ферментийн тун ба урвалын хугацааг 0,1~0,5 U, 5~ хооронд оновчтой болгох боломжтой. 10 мин;мөн урвуу транскрипцийн явцад ферментийг идэвхгүй болгож болно.
2.Энэ нь бохирдлоос сэргийлэхийн тулд ПГУ болон RT-ПГУ-д тохиромжтой.
3.Байнга хөлдөөх, гэсэхээс зайлсхийж, температурын их хэлбэлзэлд өртөхгүй байх.
4.Олшруулж буй генүүд нь dUTP-ийн ашиглалтын үр ашиг, UNG ферментийн мэдрэмтгий чанар өөр өөр байдаг тул UNG системийг ашигласнаар илрүүлэх мэдрэмж буурч байвал урвалын системийг тохируулж, оновчтой болгох шаардлагатай бөгөөд хэрэв танд техникийн дэмжлэг хэрэгтэй бол холбоо барина уу. манай компани.
