UDG/UNG ферментүүд
UDG (урацил ДНХ гликозилаза) нь ssDNA болон dsDNA дахь урацилын суурь ба сахар-фосфатын нурууны хоорондох N-гликозидын холбоосын гидролизийг хурдасгаж чаддаг.Энэ нь аэрозолийн бохирдлыг амархан хянах чадвартай бөгөөд ПГУ, qPCR, RT-qPCR, LAMP зэрэг молекул биологийн нийтлэг системд тохиромжтой.
Үзүүлэлтүүд
| Илэрхийллийн хост | Урацил ДНХ гликозилазын гентэй рекомбинант E. coli |
| Молекулын жин | 24. 8кДа |
| Цэвэр байдал | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Дулаан идэвхгүйжүүлэх | 95℃, 5~10 мин |
| Нэгжийн тодорхойлолт | Нэг нэгж (U) нь 25 хэмд 30 минутын дотор 1 мкг dU агуулсан dsDNA-ийн гидролизийг хурдасгахад шаардагдах ферментийн хэмжээг хэлнэ. |
Хадгалах
Бүтээгдэхүүнийг -25°C~-15°C хэмд хоёр жилийн турш хадгална.
Зааварчилгаа
1.Дараах системийн дагуу ПГУ-ын урвалын хольц бэлтгэх
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн (μл) | Эцсийн төвлөрөл |
| 10×ПГУ буфер (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль / LMgCl | 3 | 1.5 ммоль/л |
| dUTP(10 ммоль/л) | 3 | 0.6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10ммоль/уусгах) | 1 | 0.2 ммоль/уусгах |
| ДНХ-ийн загвар | X | - |
| Праймер1 (10мкмоль/л) | 2 | 0.4 мкмоль/л |
| Праймер 2 (10мкмоль/л) | 2 | 0.4 мкмоль/л |
| Так ДНХ Полимераз (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μл |
| Урацил ДНХ гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μл |
| ddH₂O | 50 хүртэл | - |
Жич: Туршилтын шаардлагын дагуу dUTP-ийн эцсийн концентрацийг 0.2-0.6 ммоль/л хооронд тохируулж, 0.2 ммоль/л dTTP-ийг сонгон нэмж болно.
2.Олшруулах журам
| Циклийн алхам | Температур | Цаг хугацаа | Цикл |
| dU агуулсан загварын доройтол | 25℃ | 10 мин | 1 |
| UDG идэвхжүүлэлт, загварын анхны денатураци | 95℃ | 5 ~ 10 минут | 1 |
| Денатураци | 95℃ | 10 сек |
30-35 |
| Хатаах | 60℃ | 20 сек | |
| Өргөтгөл | 72℃ | 30сек/кб | |
| Эцсийн өргөтгөл | 72℃ | 5 мин | 1 |
Жич: Туршилтын шаардлагын дагуу 25°С-ийн урвалын хугацааг 5-10 минутын дотор тохируулж болно.
Тэмдэглэл
1.UDG нь ихэнх ПГУ-ын урвалын буферд идэвхтэй байдаг.
2.Ферментийг хэрэглэх үед мөсөн саванд эсвэл мөсөн ваннд хадгалах ба хэрэглэсний дараа шууд -20 ° C-д хадгална.
3.Эрүүл мэнд, аюулгүй байдлыг хангах үүднээс лабораторийн цув, бээлий гэх мэт шаардлагатай ХХХ-ийг өмсөнө үү!
