DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Муур дугаар: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) нь нэг буюу хоёр хэлхээтэй ДНХ-г шингээх чадвартай эндодеоксирибонуклеаз юм.Энэ нь фосфодиэстерийн холбоог таньж, таслан монодезоксинуклеотид эсвэл 5'-терминал дээр фосфатын бүлэг, 3'-терминал дээр гидроксил агуулсан нэг эсвэл хоёр судалтай олигодеоксинуклеотид үүсгэдэг.DNase I-ийн идэвхжил нь Ca-аас хамаарна2+мөн Mn зэрэг хоёр валенттай металлын ионуудаар идэвхжиж болно2+болон Zn2+.5 мМ Ca2+ферментийг гидролизээс хамгаална.Mg-ийн дэргэд2+, фермент нь ДНХ-ийн аль ч хэлхээний аль ч хэсгийг санамсаргүй байдлаар таньж, салгаж чаддаг.Мн байлцуулан2+, ДНХ-ийн давхар хэлхээг нэгэн зэрэг таньж, бараг нэг цэг дээр задалж, 1-2 нуклеотид цухуйсан хавтгай төгсгөлтэй ДНХ-ийн хэлтэрхий эсвэл наалдамхай төгсгөлийн ДНХ-ийн хэлтэрхий үүсгэдэг.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Нэр | 0.1KU | 1KU | 5 КУ | 50 КУ |
| DNase I, RNase агуулаагүй | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Хадгалах нөхцөл
-25℃~-15℃ хадгалах;Мөсөн дор тээвэрлэх.
Зааварчилгаа
1. RNase-гүй хуруу шилэнд урвалын уусмалыг доор жагсаасан харьцаагаар бэлтгэнэ.
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн |
| РНХ | X мкг |
| 10 × DNase I буфер | 1 мкл |
| DNase I, RNase агуулаагүй (5U/μL) | μг РНХ-д 1 U① |
| ddH2O | 10 мкл хүртэл |
Тайлбар: ①РНХ-ийн хэмжээгээр нэмэх шаардлагатай DNase I-ийн хэмжээг тооцоол.
2. 37 ℃ 15 минутын турш;
3. 2.5мМ~5мМ эцсийн концентрацид 0.5М EDTA нэмээд урвалыг зогсоохын тулд 65℃-т 10 минут халаана.Дээжийг урвуу транскрипц гэх мэт дараагийн урвалд шууд ашиглаж болнотуршилт.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь 1μg pBR322-ыг бүрэн задлах ферментийн хэмжээ гэж тодорхойлогддог37 хэмд 10 минутын дотор ДНХ.
Чанарын шалгалт
RNase:1.6 мкг MS2 РНХ-тай 5U DNase I-ийг 37 хэмд 4 цагийн турш хэрэглэх нь задралд орохгүй.агароз гель электрофорезоор тодорхойлно.
Тэмдэглэл
1. 0.5 MEDTA-г өөрөө бэлтгэнэ үү.
2. РНХ-ийн μг тутамд 1U DNase I хэрэглэнэ.Харин РНХ 1μг-ээс бага бол 1U DNase I-г ашиглана уу.
3. Ашиглалтын явцад ферментийг мөсөн дээр байрлуулна уу.
