Superstart qPCR Premix plus-UNG
Муур дугаар: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG нь тусгайлан лиофилизацийн процесст зориулан бүтээсэн датчик дээр суурилсан илрүүлэлтийг ашиглан бодит цагийн ПГУ-ын чанарын болон тоон урвалд зориулагдсан тусгай урвалж юм.Энэ нь халуун эхлүүлэх шинэ фермент Hotstart Taq plus (DG) агуулсан бөгөөд Taq ферментийн үйл ажиллагаа нь тасалгааны температурт битүүмжилсэн бөгөөд бага температурын нөхцөлд праймерын өвөрмөц бус задралт эсвэл праймер димер үүсэхээс үүссэн өвөрмөц бус олшруулалтыг үр дүнтэй дарангуйлдаг. олшруулах урвалын өвөрмөц байдал.Энэхүү урвалж нь оновчтой qPCR-ийн тусгай буфер ба UNG/dUTP бохирдлоос хамгаалах системийг ашиглан хурдан халуун эхлүүлэхэд хүрч, qPCR урвалын үр ашиг, мэдрэмжийг ихээхэн сайжруулдаг.Энэ нь тоон үзүүлэлтийн өргөн хүрээний талбарт сайн стандарт муруйг гаргаж, тоон үзүүлэлтийг үнэн зөв хийж, ПГУ-ын үлдэгдэл бүтээгдэхүүн эсвэл аэрозолийн бохирдлоос үүдэлтэй хуурамч эерэг олшролтоос үр дүнтэй сэргийлж чадна.Энэхүү урвалж нь Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche гэх мэт үйлдвэрлэгчдийн ихэнх флюресцент тоон ПГУ-ын хэрэгслүүдтэй нийцдэг бөгөөд лиофильжсэн хэлбэрээр сайн тогтвортой байдлыг харуулдаг.
Урвалжийн найрлага
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+үнэгүй) (DG)
2. 250 мМ MgCl2
3. 4×лиопротектор (заавал биш)
Хадгалах нөхцөл
-20 хэмд удаан хугацаагаар хадгалах;4 хэмд 3 сар хүртэл хадгалах боломжтой.Хэрэглэхийн өмнө сайтар холинодавтан хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхий.
Дугуйн протокол
| Процедур | Температур. | Цаг хугацаа | Цикл |
| Хоол боловсруулах | 50℃ | 2 мин | 1 |
| Полимеразын идэвхжил | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурат | 95℃ | 10-20 секунд | 40-50 |
| Хагалгаа ба өргөтгөл | 56~64℃ | 20-60 секунд | 40-50 |
qPCR Шингэн урвал Syишний бэлтгэл
|
Найрлага |
25 мкл Эзлэхүүн |
50 мкл эзэлхүүн |
Эцсийн концентраци |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Мг2+үнэгүй) (DG) | 5 мкл | 10 мкл | 1× |
| 250 мм МгКл2 | 0.45 мкл | 0.9 мкл | 4.5 мм |
| 4 × лиопротектор1 | 6.25 мкл | 12.5 мкл | 1× |
| 25×Праймер-датчик хольц2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| ДНХ-ийн загвар3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 мкл хүртэл | 50 мкл хүртэл | —— |
1. Праймерын эцсийн концентраци 0.2μM нь ихэвчлэн сайн үр дүнг өгдөг;урвалын гүйцэтгэл муу байвал шаардлагатай бол праймерын концентрацийг 0.2-1μM-ийн хүрээнд тохируулна.Сорьцын концентрацийг ихэвчлэн градиент туршилтаар 0.1-0.3μM-ийн хязгаарт оновчтой хослолыг олохын тулд оновчтой болгодог.
2. Төрөл бүрийн загварт агуулагдах зорилтот генийн хуулбарын тоо харилцан адилгүй байдаг;Шаардлагатай бол загвар нэмэх оновчтой хэмжээг тодорхойлохын тулд градиент шингэрүүлэлт хийж болно.
3. Энэ системийг лиофилизаци хийх боломжтой;Хэрэглэгчид энэ системийг хөлдөөх-хатаах шаардлагагүйгээр ашиглах үед 4 × лиопротекторыг сонгон нэмж болно; хэрэв хөлдөөж хатаасан бүтээгдэхүүн шаардлагатай бол шингэн урвалжийн үе шатанд бүтээгдэхүүний гүйцэтгэлийг баталгаажуулах үед лиофильжүүлсэн системийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдтэй нийцэж байгаа эсэхийг баталгаажуулахын тулд 4 × лиопротектор нэмэх шаардлагатай. болон нөлөө.
Системийг ашиглах үедг хөлдөөж хатаахад зориулж бэлтгэнэ систем as дараах:
| Найрлага | 25мкл Урвалын систем |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+үнэгүй) (DG) | 5 мкл |
| 250 мм МгКл2 | 0.45 мкл |
| 4 × лиопротектор | 6.25 мкл |
| 25×Праймер-датчик хольц | 1 мкл |
| ddH2O | 18 ~ 20 мкл хүртэл |
* Хэрэв хөлдөөж хатаах өөр систем шаардлагатай бол тусад нь лавлана уу.
Лиофилизацийн үйл явцss
| Процедур | Температур. | Цаг хугацаа | Нөхцөл байдал | Даралт |
| Урьдчилан хөлдөөх | 4℃ | 30 мин | Барь |
1 атм |
| -50℃ | 60 мин | Хөргөх | ||
| -50℃ | 180 мин | Барь | ||
| Анхдагч хатаах | -30℃ | 60 мин | Халаалт |
Эцсийн вакуум |
| -30℃ | 70 мин | Барь | ||
| Хоёрдогч хатаах | 25℃ | 60 мин | Халаалт |
Эцсийн вакуум |
| 25℃ | 300 мин | Барь |
2. Дээрх лиофилизацийн процесс нь зөвхөн лавлагаанд зориулагдсан болно.Өөр өөр төрлийн бүтээгдэхүүн, янз бүрийн хөлдөөх хатаагч нь өөр өөр параметртэй байдаг тул бодит байдалд тохируулан тохируулга хийх боломжтой.ашиглалтын үеийн нөхцөл.
3. Янз бүрийн лиофилизацийн процессууд нь өөр өөр хэмжээтэй лиофилжсэнд тохиромжтой байж болно.бүтээгдэхүүн, тиймээс том хэмжээний үйлдвэрлэлд ашиглах үед хангалттай туршилтын баталгаажуулалтыг хийх ёстой.
Лиофилизийг хэрэглэх зааварd нунтаг
1. Лиофильжүүлсэн нунтагыг богино хугацаанд центрифуг хийх;
2. Лиофильжүүлсэн нунтаг дээр нуклейн хүчлийн загварыг нэмээд 25 мкл хүртэл ус нэмнэ;
3. Центрифугээр сайтар хольж, машин дээр ажиллуулна.
Чанарын шалгалт:
1. Функциональ туршилт: qPCR-ийн мэдрэмж, өвөрмөц байдал, давтагдах чадвар.
2. Экзоген нуклеазын идэвхжилгүй, экзоген эндо/экзонуклеазын бохирдол байхгүй.
Техникийн мэдээлэл:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG нь 1~5 минутын дотор хурдан эхлүүлэх боломжийг олгодог шинэ халуун эхлүүлэх ферментийг ашигладаг;тусгай буфер найрлагаар дамжуулан энэ нь мультиплекс флюресцент тоон ПГУ-ын урвалд тохиромжтой.
2. Энэ нь флюресценцийн тоон ПГУ-ын хязгаар илрүүлэх мэдрэмжийг мэдэгдэхүйц сайжруулж, олшруулалтын муруйг хэвийн болгож, өндөр мэдрэмжтэй флюресценцийн тоон ПГУ-ын илрүүлэх урвалж болгон ашиглахад тохиромжтой, бага концентрацитай загварт флюресценцийн утга илт сайжрах болно.
3. Хагалах температур багатай эсвэл 200bp-ээс урт фрагментийн праймерын хувьд 3 үе шаттай аргыг хэрэглэхийг зөвлөж байна.
4. dUTP-ийн ашиглалтын үр ашиг болон UNG ферментийн мэдрэмж нь зорилтот генийн хувьд өөр өөр байдаг тул UNG системийг ашиглах нь илрүүлэх мэдрэмжийг бууруулахад хүргэдэг бол урвалын системийг тохируулж, оновчтой болгох шаардлагатай.Хэрэв техникийн дэмжлэг шаардлагатай бол манай компанитай холбоо барина уу.
5. Олшруулахын өмнө болон дараа зориулалтын талбай, пипеткийг ашиглах, үйл ажиллагааны явцад бээлий өмсөж, ойр ойрхон солих;ПГУ-ын бүтээгдэхүүнээр дээжийг бохирдуулахгүйн тулд ПГУ-ын дараа урвалын хоолойг нээж болохгүй.
