2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Муур дугаар: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) нь ДНХ задлах, дээж бэлтгэхгүйгээр дээжээс шууд ПГУ хийх зориулалттай.Энэхүү урвалж нь халуун эхлэлийн ДНХ полимераз, урацил ДНХ гликозилаза (UNG), RNase дарангуйлагч, MgCl зэргээс бүрдэнэ.2, dNTPs (dTTP-ийн оронд dUTP-тэй) болон тогтворжуулагч, тоон ПГУ (qPCR).Энэхүү урвалж нь дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвар өндөртэй тул хоолойны арчдас, шүлс, цусны бүлэгнэлтийн эсрэг бүхэл цус, сийвэн, ийлдэс гэх мэт дээжийг ДНХ олборлолгүйгээр шууд илрүүлэхэд хэрэглэж болно.Урвалж нь дарангуйлагчийн эсрэг ДНХ полимераза ба UNG ферментийн холимог фермент бүхий qPCR-д зориулсан хувийн буферийг ашигладаг.Тиймээс энэ нь дарангуйлагч агуулсан дээжинд зорилтот генийг сайн өсгөж, ПГУ-ын үлдэгдэл болон аэрозолийн бохирдлоос үүдэлтэй хуурамч эерэг олшролтыг дарангуйлдаг.Энэхүү урвалж нь Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche гэх мэт ихэнх флюресцент тоон ПГУ-ын хэрэгслүүдтэй нийцдэг.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
1. 50×SensiDirect фермент/UNG холимог
2. 2×SensiDirect Premix буфер (dUTP)
Хадгалах нөхцөл
Бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг удаан хугацаагаар хадгалахын тулд -20 хэмд, 3 сар хүртэл 4 хэмд хадгална.Гэсгээсний дараа сайтар хольж, хэрэглэхийн өмнө центрифуг хийнэ.Байнга хөлдөөх гэсгээхээс зайлсхий.
Дугуйн протокол
| Алхам | Температур | Цаг хугацаа | Цикл |
| Хоол боловсруулах | 50℃ | 2мин | 1 |
| Полимеразын идэвхжил | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурат | 95℃ | 10-20 секунд | 40-50 |
| Хагалах/өргөтгөх | 56-64 хэм байна | 20-60-аад он |
Пипет хийх заавар
| Урвалж | Эзлэхүүн тутамд урвал | Нэг урвалын хэмжээ | Эцсийн концентраци |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5 мкл | 25 мкл | 1× |
| 50×SensiDirect фермент/UNG холимог | 0.5 мкл | 1 мкл | 1× |
| 25×Праймер-датчик хольц1, 2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| Дээж3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Нийт эзлэхүүн | 25 мкл | 50 мкл | - |
1. Праймерын эцсийн концентраци нь ихэвчлэн 0.2μM байдаг.Илүү сайн үр дүнд хүрэхийн тулд праймерын концентрацийг 0.2-1μM-ийн хүрээнд оновчтой болгож болно.
2. Ерөнхийдөө датчикийн концентрацийг 0.1-0.3μM-ийн хүрээнд оновчтой болгож болно.Пробын оновчтой концентраци нь бодит цагийн ПГУ-ын олшруулалтын хэрэгсэл, датчикийн төрөл, флюресцент шошгоны бодисын төрөл зэргээс хамаарна.Төхөөрөмжийн гарын авлага эсвэл флюресцент датчик бүрийн тусгай шаардлагыг харна уу.
3. Төрөл бүрийн сорьцууд нь дарангуйлагчийн төрөл, агуулга, зорилтот генийн хуулбарын тоог агуулдаг.Дээжийн хэмжээг бодит нөхцөлөөр авч үзэх хэрэгтэй.Шаардлагатай бол нуклеазгүй ус эсвэл TE буфер нэмж сорьцыг шингэрүүлнэ.
4. Төрөл бүрийн дээжийн санал болгож буй хэмжээ:
| Дээж | Нэг хүний эзлэхүүн 50 мкЛ урвал | Хамгийн их харьцаа |
| Антикоагулянт бүхий бүхэл цус | 2.5 мкл | 5% |
| Плазм | 15 мкл | 30% |
| Ийлдэс | 10 мкл | 20% |
| Хоолойн арчдас | 10 мкл | 20% |
| Шүлс | 10 мкл | 20% |
Чанарын шалгалт
1. Функцийг илрүүлэх: qPCR-ийн мэдрэмж, өвөрмөц байдал, давтагдах чадвар.
2. Экзоген нуклеазын үйл ажиллагаа байхгүй: экзоген эндонуклеаз ба экзонуклеазын бохирдол байхгүй.
Бүтээгдэхүүний тэмдэглэл
1. Энэхүү бүтээгдэхүүн нь 1-5 минутын дотор идэвхждэг шинэ төрлийн халуун эхлэх ДНХ полимеразаг ашигладаг. Урвалын буфер нь оновчтой болсон тул датчикийн аргаар давхар эсвэл олон тооны флюресценцийн тоон ПГУ-д илүү тохиромжтой.
2. Хэрэв ПГУ-ын олшруулалтын Rn утга хэт бага эсвэл олшруулалт нь илт дарангуйлагдсан бол дээжийн хэмжээг багасгах, урвалын хэмжээг нэмэгдүүлэх эсвэл дээжийг өмнөх шингэрүүлэлт нь үр дүнг сайжруулна.
3. Цус, шүлс, шээс, хоолойны арчдас зэргийг цуглуулахдаа эмнэлзүйн шалгуурын шаардлагыг дагаж мөрдөх ёстой бөгөөд нуклейн хүчлийн задралаас урьдчилан сэргийлэхийн тулд шинэ дээжийг ашиглаж болно.
4. Янз бүрийн ампликонуудын ашиглалтын үр ашиг dUTP болон UNG-д мэдрэмтгий чанар өөр өөр байдаг тул UNG системийг ашиглах үед илрүүлэх мэдрэмж буурч байвал урвалжуудыг оновчтой болгох хэрэгтэй.Шаардлагатай бол техникийн дэмжлэг авахын тулд бидэнтэй холбоо барина уу.
5. Нэг үе шаттай урвалын хооронд ПГУ-ын бүтээгдэхүүн олшрохоос зайлсхийхийн тулд туршилтын тусгай талбай болон пипеткийг олшруулах шаардлагатай.Бээлийтэй ажиллах ба ойр ойрхон солих, ПГУ-ын олшруулсны дараа урвалын хоолойг нээж болохгүй.
