Зэрлэг Так ДНХ полимераз
Так ДНХ Полимераз нь Thermus aquaticus YT-1-ийн термостат ДНХ полимераз бөгөөд 5′→3′ полимеразын идэвхжил, 5′ флап эндонуклеазын идэвхжилтэй.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10 × Так буфер | 2 × 1 мл | 2 × 10 мл | 2х50 мл | 5х200 мл |
| Так ДНХ Полимераз (5 U/μL) | 0.1 мл | 1 мл | 5 мл | 5х10 мл |
Хадгалах нөхцөл
0°С-аас доош температурт тээвэрлэж, -25°C~-15°C хэмд хадгална.
Нэгжийн тодорхойлолт
Нэг нэгж нь 75°С-т 30 минутын дотор 15 нмоль dNTP-ийг хүчилд уусдаггүй материалд оруулах ферментийн хэмжээг хэлнэ.
Чанарын шалгалт
1.Уургийн цэвэр байдлын шинжилгээ (SDS-PAGE):Taq ДНХ полимеразын цэвэршилтийг SDS-PAGE шинжилгээгээр ≥95% тодорхойлсон.
2.Endонуклеазын үйл ажиллагаа:Доод тал нь 5 U Taq ДНХ полимераза нь 1 мкг λДНХ-тай 37 ℃ температурт 16 цагийн турш тодорхойлогдсоны дагуу илрэх боломжгүй задрал үүсгэдэггүй.
3.Экзонуклеазын үйл ажиллагаа:1 мкг λ -Hind Ⅲ задралын ДНХ-ийн дор хаяж 5 U Taq ДНХ полимераза нь 37 ℃ температурт 16 цагийн турш задрахад илрэх боломжгүй задрал үүсэхгүй.
4.Никазын үйл ажиллагаа:1 мкг pBR322 ДНХ-тай хамгийн багадаа 5 U Taq ДНХ полимеразыг 37°С-т 16 цагийн турш хэрэглэх нь тодорхойлогдсоны дагуу илрэхүйц задралгүй болно.
5.RNase үйл ажиллагаа:1.6 мкг MS2 РНХ бүхий хамгийн багадаа 5 U Taq ДНХ полимеразыг 37°С-т 16 цагийн турш хэрэглэхэд илэрсэн задрал байхгүй болно.
6.E. coliДНХ:5 U Taq ДНХ полимеразыг E. coli геномын ДНХ байгаа эсэхийг E. coli 16S rRNA локусын өвөрмөц праймер бүхий TaqMan qPCR ашиглан шалгадаг.E. coli геномын ДНХ-ийн бохирдол ≤1 хуулбар байна.
7.ПГУ-ын олшруулалт (5.0 кб Ламбда ДНХ)- ПГУ-ын олшруулалтын 25 циклийн 5 нэгж Так ДНХ Полимераз бүхий 5 нг Ламбда ДНХ агуулсан 50 мкл урвалын үр дүнд хүлээгдэж буй 5.0 кб бүтээгдэхүүн гарна.
Урвалын тохиргоо
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн |
| ДНХ-ийн загварa | сонголттой |
| 10 мкМ урагшлах праймер | 1 мкл |
| 10 мкм урвуу праймер | 1 мкл |
| dNTP холимог (тус бүр 10мМ) | 1 мкл |
| 10 × Так буфер | 5 мкл |
| Так ДНХ полимеразб | 0.25 мкл |
| Нуклеазгүй ус | 50 мкл хүртэл |
Тэмдэглэл:
1) Өөр өөр загваруудын оновчтой урвалын концентраци өөр өөр байдаг.Дараах хүснэгтэд 50 мкл урвалын системийн хэрэглэхийг санал болгож буй загварыг харуулав.
| ДНХ | Дүн |
| Геном | 1 нг-1 мкг |
| Плазмид эсвэл вирус | 1 хуудас-1 нг |
2) Так ДНХ Полимеразын оновчтой концентраци нь тусгай хэрэглээнд 0.25 мкл~1 мкл хооронд хэлбэлзэж болно.
УрвалХөтөлбөр
| Алхам | Температур(°C) | Цаг хугацаа | Цикл |
| Анхны денатурациa | 95 ℃ | 5мин | - |
| Денатураци | 95 ℃ | 15-30 секунд | 30-35 мөчлөг |
| Хатаахб | 60 ℃ | 15 с | |
| Өргөтгөл | 72 ℃ | 1кб/мин | |
| Эцсийн өргөтгөл | 72 ℃ | 5мин | - |
Тэмдэглэл:
1) Анхны денатурацийн нөхцөл нь ихэнх олшруулалтын урвалуудад тохиромжтой бөгөөд загварын бүтцийн нарийн төвөгтэй байдлаас хамааран өөрчилж болно.Загварын бүтэц нь нарийн төвөгтэй бол анхны денатурацийн үр нөлөөг сайжруулахын тулд денатурацийн өмнөх хугацааг 5-10 минут хүртэл сунгаж болно.
2) Праймерын Tm утгаас ерөнхийдөө 3~5 ℃-аар бага байхаар тохируулж, халаах температурыг тохируулах шаардлагатай;Нарийн төвөгтэй загваруудын хувьд үр дүнтэй олшруулалтад хүрэхийн тулд зөөлрүүлэх температурыг тохируулах, сунгах хугацааг уртасгах шаардлагатай.
